1,25-羥基維生素D2注射用納米乳劑的研究.pdf

1、1,25-羥基維生素D2是維生素D2的合成衍生物，用于繼發(fā)性甲狀旁腺功能亢進癥(SHPT)的治療，因其較少引起高血鈣、高血磷等毒副作用而引起關注。目前上市的劑型有軟膠囊劑、注射劑。由于1,25-羥基維生素D2難溶于水，因而增大其水中溶解度成為研究的重點與難點。本研究根據(jù)藥物的理化性質(zhì)、藥理作用和靜脈注射給藥的特點，首次研究開發(fā)了1,25-羥基維生素D2新型注射用納米乳劑，解決了藥物難溶于水的問題，與現(xiàn)有的上市注射液相比，不但可以增加藥物

2、的穩(wěn)定性，而且顯著減少表面活性劑和有機溶劑的用量，從而降低毒副作用，增加臨床適用性。該注射用納米乳劑質(zhì)量可控、工藝簡單、物理化學性質(zhì)穩(wěn)定，為1,25-羥基維生素D2藥物新劑型的開發(fā)奠定了基礎。
　　在處方前研究中，根據(jù)納米乳劑的劑型特點及1,25-羥基維生素D2自身理化性質(zhì)，考察了1,25-羥基維生素D2在不同溶媒與油相中的溶解情況，并建立了高效液相色譜法測定1,25-羥基維生素D2的含量及有關物質(zhì)。由紫外分光光度計掃描可得，1,

3、25-羥基維生素D2在265nm有最大吸收峰，降解產(chǎn)物在274nm有最大吸收峰，最終確定265nm作為藥物含量檢測的波長，274nm為有關物質(zhì)檢測的波長，色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠作為固定相；以乙腈-水（85:15）作為流動相。以峰面積（A）對濃度（C）進行線性回歸，得回歸方程A=201098C-8412.5（R2=0.9998，n=9），說明1,25-羥基維生素D2在0.06~4.00μg/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關系，通過回收率試

4、驗、重復性試驗、精密度試驗及樣品溶液的穩(wěn)定性研究表明該方法有較高的精密度、準確度及重現(xiàn)性，各輔料對主藥的檢測無干擾作用，可用于1,25-羥基維生素D2注射用納米乳劑的含量及有關物質(zhì)的測定，為后續(xù)注射用納米乳劑的質(zhì)量控制和穩(wěn)定性研究奠定了基礎。
　　通過單因素試驗考察處方中各組成成分、用量對1,25-羥基維生素D2溶解性的影響，1,25-羥基維生素D2在不同的表面活性劑、助表面活性劑、油相中的溶解性不同，篩選出1,25-羥基維生素D

5、2溶解性較大的表面活性劑、助表面活性劑及油相，繪制三元相圖篩選納米乳的形成區(qū)域，通過各處方對納米乳劑成乳效果的影響，篩選出納米乳中表面活性劑、助表面活性劑及油相的最佳配比以及制備工藝參數(shù)，再通過溶解性以及穩(wěn)定性的考察，確定最優(yōu)處方，并在此基礎上進行了處方的工藝驗證，最終確定最優(yōu)處方以Tween80（吐溫80）作為表面活性劑、乙醇作為助表面活性劑、中鏈甘油三酯（MCT）作為油相。由于1,25-羥基維生素D2自身理化性質(zhì)，該藥氧化條件下不穩(wěn)

6、定，易氧化發(fā)生降解，應加入抗氧劑，由穩(wěn)定性考察結(jié)果，最終確定加入2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚（BHT）作為抗氧劑。
　　按照優(yōu)選處方制備注射用納米乳劑，對其含量、有關物質(zhì)、pH值、粒徑、Zeta電位、滲透壓等各項指標進行測定，所制備的納米乳劑的粒徑為20~50nm之間，注射用納米乳劑pH值在6~8之間，滲透壓在285~340mOsmol/Kg之間，確定注射用納米乳劑的質(zhì)量標準。對1,25-羥基維生素D2注射用納米乳劑的穩(wěn)定性進行

7、了初步研究，結(jié)果表明，1,25-羥基維生素D2對光照、溫度比較敏感，在光照、高溫條件下易發(fā)生降解，因此該注射用納米乳劑需在低溫、避光的條件儲存；模擬上市包裝的條件下，進行了加速（25℃）6個月穩(wěn)定性考察，結(jié)果表明雜質(zhì)A（1,25-羥基維生素D2的光學異構體）明顯增加，其他指標均符合規(guī)定。長期（4-8℃）穩(wěn)定性考察6個月，含量、有關物質(zhì)等各項指標均符合規(guī)定。通過穩(wěn)定性對比研究結(jié)果表明，與上市注射液對比，注射用納米乳穩(wěn)定性更高，室溫25℃放

8、置1個月，上市注射液含量降低了3.41％，有關物質(zhì)含量升高到3.29%；注射用納米乳劑的含量降低了1.65%，有關物質(zhì)含量升高到0.98%。40℃放置10天，上市注射液含量降低了5.64%，有關物質(zhì)含量升高到5.96%；注射用納米乳劑的含量降低到3.68%，有關物質(zhì)含量升高到3.71%，可見注射用納米乳劑相較于上市注射液穩(wěn)定性更高。與上市注射液組成對比，上市注射液中表面活性劑為1%和助溶劑為5%，注射用納米乳劑表面活性劑僅占0.35%，

9、助溶劑僅占0.075%，降低了表面活性劑與助溶劑的使用量，提高了臨床適應性。
　　與上市注射液對比，對注射用納米乳劑的溶血性及血管刺激性進行體內(nèi)安全性評價。由血管刺激性試驗結(jié)果顯示，在低中高三個劑量下，本品給藥后48h，96h后注射部位均無紅腫，充血等刺激性；上市注射液在高劑量下，血管出現(xiàn)輕微紅腫現(xiàn)象；由病理切片結(jié)果顯示，上市注射液高劑量組出現(xiàn)明顯的嗜酸性粒細胞升高現(xiàn)象，炎癥反應明顯，血管內(nèi)皮出現(xiàn)輕微破損現(xiàn)象，證明上市注射液在高劑

10、量下對血管具有一定刺激性；而本品高劑量條件下未發(fā)現(xiàn)明顯的炎癥反應，且血管壁完整，說明與上市注射液相比，1,25-羥基維生素D2注射用納米乳劑可以明顯降低血管刺激性。由溶血性試驗結(jié)果可見，本品無溶血性反應。
　　綜上所述，本文將1,25-羥基維生素D2制成注射用納米乳劑，不僅提高了1,25-羥基維生素D2在水中的溶解度，且顯著減少了表面活性劑及有機溶劑的使用量，從而降低血管刺激性等毒副作用，并提高了藥物的穩(wěn)定性，本劑型制備工藝簡單、