抑制心肌組織骨橋蛋白的表達減輕擴張型心肌病小鼠心室重構(gòu)以及黏著斑激酶介導(dǎo)骨橋蛋白誘導(dǎo)心臟成纖維細胞分泌Ⅰ型膠原纖維的研究.pdf

1、本文主要從以下兩部分展開論述：
　　第一部分:抑制心肌組織骨橋蛋白的表達減輕擴張型心肌病小鼠心室重構(gòu)
　　目的:骨橋蛋白是體內(nèi)一種多種功能的細胞因子，參與集體多種生物學(xué)活動。研究發(fā)現(xiàn)骨橋蛋白與心肌纖維化有著密切聯(lián)系。在原發(fā)性擴張型心肌病心臟組織以及壓力負荷增大而引起擴張型心肌病的心臟組織中均發(fā)現(xiàn)OPN表達量有異常增高。有研究報道，心肌細胞過量表達OPN能誘發(fā)擴張型心肌病的發(fā)生。黏著斑激酶是胞漿內(nèi)的一種酪氨酸激酶，在細胞的遷移

2、增殖以及生存方面起重要作用。并且參與OPN相關(guān)的的信號通路。我們實驗主要目的是探究OPN在擴張型心肌病的病理，以及OPN與FAK在擴張型心肌病心肌纖維化和心肌重構(gòu)中的作用。
　　方法:選用自發(fā)性擴張型心肌病小鼠模型cTnTR141W轉(zhuǎn)基因小鼠為實驗動物。8周大小時進行開胸手術(shù)，并在心臟左心室游離壁注射載有OPN-shRNA的慢病毒，達到沉默心肌組織表達OPN的效果。實驗分為3組，假手術(shù)組，僅進行手術(shù)，不注射藥物。對照病毒組，注射不

3、含shRNA的對照病毒，OPN-shRNA抑制組，注射含有OPN-shRNA的慢病毒。4周后進行小鼠超聲檢測評價心臟擴張程度以及左室功能。取材，提取蛋白和mRNA進行western blot以及PCR實驗，以檢驗心臟組織Ⅰ型膠原纖維和磷酸化FAK的表達。用MASSON染色的方法檢測心肌纖維化和心室重構(gòu)程度。
　　結(jié)果:OPN-shRNA抑制組的小鼠射血分數(shù)，左室短軸縮短率較高，收縮期左室前壁較厚，表明OPN抑制有助于擴張型心肌病的

4、心功能改善。Masson染色顯示OPN-shRNA抑制組小鼠心肌纖維化明顯輕于另外兩組。此外western blot，PCR結(jié)果顯示OPN-shRNA抑制組的小鼠α-SMA，Ⅰ型膠原以及磷酸化FAK, Akt表達較少。
　　結(jié)論:抑制擴張型心肌病心肌組織中OPN的表達，能達到減輕心肌纖維化的程度，減少心室重構(gòu)，增強擴張型心肌病心臟功能的作用。
　　第二部分:黏著斑激酶介導(dǎo)骨橋蛋白誘導(dǎo)的心臟成纖維細胞分化以及Ⅰ型膠原的合成

5、r>　　黏著斑激酶(Focal Adhesion Kinase，F(xiàn)AK)是一種非酪氨酸激酶，在細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中處于十分重要的位置，參與細胞運動以及細胞存活。在近年來的研究中發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)AK與各器官的纖維化存在著重要的作用。我們假設(shè)，骨橋蛋白(osteopontin，OPN)一種與纖維化關(guān)系緊密的細胞外基質(zhì)蛋白，能夠刺激成纖維細胞分泌膠原蛋白，并且這一過程是經(jīng)過FAK介導(dǎo)的。因此我們提取小鼠乳鼠心臟成纖維細胞進行試驗驗證這一假設(shè)，用骨橋蛋白刺激

6、小鼠成纖維細胞，并且在刺激前12小時給予FAK抑制劑抑制FAK活性。用western blot和ELISA方法分別檢測胞質(zhì)內(nèi)和細胞上清液Ⅰ型膠原的含量，用免疫熒光方法檢測α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)。實驗結(jié)果顯示，OPN能導(dǎo)致成纖維細胞分泌Ⅰ型膠原蛋白和α平滑肌肌動蛋白，并且這種作用能被FAK抑制劑所減弱。我們得出結(jié)論，F(xiàn)AK能夠在OPN誘導(dǎo)小鼠心臟成纖維細胞分化為肌成纖維細胞以及心臟的纖維化過程中起重要作用。這一發(fā)現(xiàn)有可能對于纖維化