基于金納米微粒的化學(xué)發(fā)光特定序列DNA分析.pdf

1、醫(yī)學(xué)研究表明:許多疾病如癌癥和遺傳病的發(fā)生都與基因的突變有關(guān),因此對特定序列DNA的分析、檢測在基因篩選、法醫(yī)鑒定、遺傳疾病的早期診斷和治療等方面具有十分深遠(yuǎn)的意義。特定序列DNA檢測由于具有所需時間短、樣品消耗少、分析成本低等突出優(yōu)點,一直吸引著各國學(xué)者的關(guān)注,檢測方法包括電化學(xué)法、分光光度法、酶法、熒光法、同位素法和化學(xué)發(fā)光法(CL)等。各種方法各有優(yōu)缺點,其中電化學(xué)法、酶法、熒光法、CL法在近幾年發(fā)展迅速。
　　 化學(xué)發(fā)光

2、(CL)分析法不需光源,儀器設(shè)備簡單、操作簡便,具有極高的靈敏度,目前已成功地應(yīng)用在藥學(xué)、生物學(xué)、分子生物學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)和環(huán)境學(xué)等諸多領(lǐng)域。金納米微粒制備過程簡單,價格便宜,制備的納米微粒標(biāo)記物性質(zhì)穩(wěn)定,生物活性損失小,是一種理想的標(biāo)記分子。因此,本論文以金納米微粒為標(biāo)記物,采用CL分析法,發(fā)展了一種具有創(chuàng)新意義的基于金納米微粒的CL特定序列DNA分析法,整個論文由以下三個部分構(gòu)成:
　　 (1)緒論:介紹了特定序列DNA檢測的研

3、究進展及其意義;以不同的標(biāo)記物分類,包括:金屬離子標(biāo)記、DNA酶標(biāo)記、以及基于酶標(biāo)記的DNA檢測技術(shù)等。介紹了特定序列DNA分析方法的研究進展,并列舉了近年來它們在該分析領(lǐng)域的典型示例。
　　 (2)基于磁性微球和金納米微粒的特定序列DNA化學(xué)發(fā)光檢測新技術(shù):乙型病毒性肝炎作為一種世界性的疾病,已經(jīng)受到公眾和政府部門的高度重視。乙肝病毒快速、有效的檢測對乙肝診斷、治療,以及控制其傳染等方面具有重要的意義。
　　 本章建立

4、了一種基于羧基磁性微球和金納米微粒的DNA化學(xué)發(fā)光檢測新技術(shù),首先固定捕獲探針在磁性微球表面,與目標(biāo)DNA雜交,再與報告序列修飾的金納米微粒標(biāo)記物雜交,隨后采用魯米諾.硝酸銀體系直接檢測目標(biāo)DNA。文中以含35個堿基的乙肝病毒DNA片段作為分析物,DNA檢測的線性范圍為0.1-100fmol(R2=9819),檢測限為50amol。
　　 (3)基于96孔板和金納米微粒的特定序列DNA化學(xué)發(fā)光檢測新技術(shù):對于金納米微粒的檢測,傳

5、統(tǒng)的方法相對耗時長,操作復(fù)雜,常常需要特殊的技術(shù)步驟;因此需要開發(fā)出一種快速、簡單、易用而又靈敏度高的DNA檢測方法。
　　 本章建立了一種基于96孔板和金納米微粒的DNA化學(xué)發(fā)光檢測新方法及其放大技術(shù),首先固定捕獲探針在96孔板表面,與目標(biāo)DNA雜交,再與報告序列修飾的金納米微粒標(biāo)記物雜交,反應(yīng)完成后加入NH20H和HAuCL4,進行羥胺方大反應(yīng),最后采用魯米諾.硝酸銀體系直接檢測目標(biāo)DNA。DNA檢測的線性范圍為0.0025