乙型腦炎病毒對小鼠組織的嗜性及影響的形態(tài)學研究.pdf

1、日本乙型腦炎病毒是黃病毒科黃病毒屬的成員之一,具有嗜神經性,其引起的日本乙型腦炎是一種嚴重危害人畜健康的蟲媒病毒性疾病。疫苗接種是控制乙腦的可靠方法。目前對乙腦尚無特異性療法,主要是支持療法和對癥治療。乙腦的致病機理研究對從根本上控制乙腦至關重要。然而,乙腦的致病機制目前仍不十分清楚。本研究以小鼠為試驗模型,研究了乙腦病毒在小鼠體內分布及其對腦、脾臟等臟器的組織病理學影響。本論文主要從以下方面進行了研究:
　　 1.乙腦病毒對小

2、鼠各器官的組織病理學影響本試驗以SPF級4周齡雌性BALB/c小鼠為試驗動物,用組織病理學方法檢測乙腦病毒對小鼠各組織器官結構的影響變化。結果顯示:當乙腦病毒感染后,病理變化主要發(fā)生在腦和脾臟。在小鼠腦內,呈現(xiàn)非化膿性腦炎病變。組織學表現(xiàn)為神經元壞死、血管管套現(xiàn)象、膠質細胞結節(jié)。在感染組小鼠脾臟中,白髓面積增加,紅髓面積相對減少,且白髓增加與紅髓減少的改變隨時間呈現(xiàn)一定的規(guī)律。即從感染后的2 d至4 d,脾臟有淤血現(xiàn)象。感染后第6 d,

3、白髓面積輕微增加,紅髓面積相對少量減少。感染后第8 d至10 d,白髓面積明顯增加,且白髓內淋巴細胞明顯增多,紅髓面積相對明顯減少。在感染組小鼠脾臟中還觀察到壞死現(xiàn)象。在正常對照組,小鼠脾臟未見明顯病變。小鼠其他器官如肝臟、胸腺、腎臟、肺臟、皮膚、胃的組織學結構并未發(fā)現(xiàn)明顯異常。結果驗證了乙腦病毒的神經嗜性,且對其他組織影響較小。脾臟內淋巴細胞數(shù)量的改變表明淋巴細胞可能在乙腦病毒體內外周組織中的游走起到一定作用。
　　 2.乙腦

4、病毒對小鼠腦的IHC與凋亡分析利用IHC法研究了乙腦病毒對小鼠腦的影響。研究結果表明乙腦病毒P3強毒株對神經元有直接侵染作用,引起小鼠腦呈現(xiàn)明顯的神經炎癥變化,免疫組織學具體表現(xiàn)為多數(shù)星形膠質細胞突起拉長、伸展,呈現(xiàn)出抵御乙腦病毒的激活狀態(tài),尤其是海馬部位的星形膠質細胞激活明顯。小膠質細胞突起伸展,也呈現(xiàn)出明顯的抵御乙腦病毒的激活狀態(tài)。這些神經炎癥會對神經元起到一定的保護作用,然而過度的神經炎癥又會進一步促進神經元損傷。
　　

5、采用TUNEL凋亡法,對小鼠感染乙腦病毒P3強毒株后的腦內凋亡進行了研究。研究發(fā)現(xiàn)腦中血管內皮細胞呈現(xiàn)較強的標記熒光信號,表明腦的血管內皮細胞在乙腦病毒的影響下有明顯的凋亡作用。此結果對解釋乙腦病毒突破BBB的途徑有一定意義。
　　 3.乙腦病毒對小鼠脾臟的IHC與凋亡分析小鼠頸部皮下接種日本乙型腦炎病毒P3強毒株,并用IHC法CD3+抗體檢測T淋巴細胞。結果分析顯示,T淋巴細胞的數(shù)量在感染后第O d至3 d減少,3 d到7 d

6、增加,7 d到10 d再次顯著性降低。此外,神經癥狀出現(xiàn)在感染后6 d。上述結果提示,細胞免疫在對抗日本乙型腦炎病毒的第一期病毒血癥中起著至關重要的作用,而免疫反應在第一期病毒血癥期免疫抑制后激活,且神經功能障礙在細胞免疫激活時出現(xiàn)。結合結果中T淋巴數(shù)目第7 d至10 d顯著性減少和神經癥狀出現(xiàn)在感染后6 d,可以推測T淋巴細胞在乙腦病毒轉移至腦可能發(fā)揮了一定的作用,脾臟T淋巴細胞在感染后第8 d至10 d顯著減少可能是脾臟T淋巴細胞受

7、損或轉移至血,甚至入腦。乙腦病毒很可能通過T淋巴細胞進入中樞神經系統(tǒng)并引起神經癥狀。T淋巴細胞轉移至腦發(fā)揮其免疫監(jiān)視作用,對出現(xiàn)神經炎癥的小鼠起到保護作用,避免其死亡。然而,如果細胞免疫不足,進入腦的T淋巴細胞反而能夠加劇神經炎癥,并導致乙腦病毒在T淋巴細胞中潛藏。感染后神經癥狀出現(xiàn)的第六天是第一期病毒血癥過渡至第二期病毒血癥的關鍵點。一旦乙腦病毒突破BBB,神經元開始受到威脅,小膠質細胞和星形膠質細胞可能開始防御性激活。巨噬細胞免疫組

8、織學結果中脾臟中巨噬細胞增加,表明對脾臟內壞死的細胞起到吞噬作用,也提示處于向腦中轉移的準備階段。本章研究結果顯示了小鼠日本乙型腦炎病毒感染后特有的免疫病理變化,并進一步豐富了日本乙型腦炎免疫病理機制。
　　 采用TUNEL凋亡法,對小鼠感染乙腦病毒P3強毒株后的脾臟內凋亡情況進行了研究。研究發(fā)現(xiàn)脾臟在乙腦病毒的影響下,并沒有產生明顯凋亡。本章研究結果符合病毒侵入體內淋巴細胞不凋亡,只對其他組織如腦的凋亡起調節(jié)作用的說法。脾臟中