針刺大腸俞募穴對(duì)功能性便秘小鼠EGC細(xì)胞形態(tài)學(xué)及GDNF表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的：
　　本研究擬以功能性便秘為研究對(duì)象，以功能性便秘動(dòng)物模型為研究載體，從影響胃腸動(dòng)力的關(guān)鍵環(huán)節(jié)EGC、GDNF入手，探討大腸俞募配穴治療功能性便秘的效應(yīng)及其外周作用機(jī)制。
　　方法：
　　采用64只SPF級(jí)別的KM小鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為空白對(duì)照組，模型組，針刺組，EGC組4個(gè)組，每組16只小鼠。以治療時(shí)間一周為一個(gè)療程，每組動(dòng)物根據(jù)治療時(shí)長(zhǎng)各分為一周和二周兩個(gè)亞組，每個(gè)亞組8只，分別于接受一周和二周的針刺后取標(biāo)

2、本檢測(cè)。空白對(duì)照組給予0.9％生理鹽水以10mg/kg·d的劑量進(jìn)行灌胃，灌胃容量為0.1ml/10g，持續(xù)14d。模型組、針刺組和EGC組采用復(fù)方地芬諾脂混懸液以10mg/kg·d的劑量進(jìn)行灌胃，灌胃容量為0.1ml/10g，持續(xù)14d。造模結(jié)束后，空白對(duì)照組和模型組只固定不針刺，針刺組和EGC組接受一周和二周的針刺治療，其中EGC組在接受針刺治療之前須進(jìn)行EGC抑制劑腹腔注射。治療結(jié)束后取動(dòng)物標(biāo)本，經(jīng)固定、切片和染色后采用光鏡和電鏡

3、觀察EGC細(xì)胞形態(tài)學(xué)和結(jié)腸組織病理改變情況，以TUNEL染色法檢測(cè)EGC細(xì)胞凋亡情況，以及使用免疫組化技術(shù)與原位雜交技術(shù)對(duì)結(jié)腸組織中GDNF蛋白及mRNA的含量進(jìn)行檢測(cè)，比較組間差異。
　　結(jié)果：
　　1．組織形態(tài)學(xué)結(jié)果：光鏡和電鏡下可見空白對(duì)照組結(jié)腸組織神經(jīng)叢豐富、EGC細(xì)胞形態(tài)正常。模型組，針刺組，EGC組結(jié)腸組織均有不同程度的病理性形態(tài)學(xué)改變，如EGC細(xì)胞變性或細(xì)胞結(jié)構(gòu)不完整、黏膜神經(jīng)叢水腫、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等，其中針刺組

4、病理改變最輕。
　　2．TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果：經(jīng)過(guò)對(duì)凋亡細(xì)胞陽(yáng)性率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，針刺一周、二周組與模型一周、二周組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），EGC組與模型組相比EGC細(xì)胞凋亡率有所下降，但與針刺組相比仍有一定差距。
　　3．GDNF蛋白表達(dá)結(jié)果：模型組結(jié)腸組織中GDNF蛋白表達(dá)水平顯著降低（與空白對(duì)照組比較P<0.01）。針刺大腸俞募穴可提高結(jié)腸組織中GDNF蛋白及其mRNA的表達(dá)水平（針刺一周、二周組及EG

5、C二周組與模型組比較均P<0.05）。EGC一周組顯示結(jié)腸組織中GDNF蛋白表達(dá)與模型組比較無(wú)差異（P＞0.05），與針刺組比較顯著降低（P<0.05）。
　　4．GDNFmRNA表達(dá)結(jié)果：模型組結(jié)腸組織中GDNFmRNA蛋白表達(dá)水平相比空白對(duì)照組顯著降低（P<0.01）。針刺大腸俞募穴可提高結(jié)腸中GDNFmRNA的表達(dá)水平（針刺組、EGC組與模型組比較均P<0.05）。EGC組GDNFmRNA的表達(dá)水平高于模型組（P<0.05）