應(yīng)用Faecalibacterium菌作為水體糞便污染指示菌的研究.pdf

1、傳統(tǒng)的示蹤微生物大腸桿菌(E.coli)、糞腸球菌屬(Enterococcus spp.)、雙歧桿菌(Bifidobacterium)、產(chǎn)氣莢膜菌（Clostridium perfringens）、普雷沃氏菌（Prevotella）、動(dòng)物腸道病毒等在水質(zhì)示蹤檢測(cè)中存在較多局限性，難以準(zhǔn)確示蹤水體污染程度。最新的研究表明：Faecalibacterium菌是人和動(dòng)物腸道中的優(yōu)勢(shì)菌群，不同宿主腸道內(nèi)的Faecalibacterium菌基因上

2、存在顯著差異。根據(jù)這些基因差異可以區(qū)分糞便來源，可極大的彌補(bǔ)傳統(tǒng)糞便污染示蹤微生物的缺陷。
　　通過設(shè)計(jì)的一對(duì)通用引物FaU-F和FaU-R對(duì)人、豬、牛、羊、雞和鴨六種動(dòng)物糞便中的Faecalibacterium菌進(jìn)行了檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：選取的六種動(dòng)物的糞便基因組DNA樣品中都擴(kuò)增出了相同大小的目的片段，片段大小為500bp，說明了人和動(dòng)物腸道Faecalibacterium菌的廣泛存在的特性。
　　根據(jù)人腸道內(nèi)Faeca

3、libacterium菌設(shè)計(jì)的一對(duì)引物HFB-F3和HFB-R5對(duì)人糞便基因組DNA進(jìn)行了多次PCR擴(kuò)增反應(yīng)，結(jié)果表明：最適PCR反應(yīng)條件為：退火溫度為55℃，引物濃度為10μmol/L，模版為50ng，擴(kuò)增循環(huán)數(shù)是35次。采用HFB-F3和HFB-R5引物對(duì)提取的人糞便基因組DNA進(jìn)行檢測(cè)，采集的10例糞便樣品中有6例擴(kuò)增出來目的條帶，片段大小為399bp，陽(yáng)性擴(kuò)增率為60％。選取的雞，鴨，豬，狗，牛五種動(dòng)物糞便樣品基因組DNA作為特

4、異性對(duì)照試驗(yàn)，所有樣品均未有目的條帶產(chǎn)生。
　　根據(jù)雞腸道內(nèi)Faecalibacterium菌設(shè)計(jì)的兩對(duì)特異性引物FaCH-F1、FaCH-R1和FaCH-F2、FaCH-R2對(duì)雞糞便糞便污染進(jìn)行了檢測(cè)，研究結(jié)果顯示：利用第一對(duì)引物在40%雞的糞便樣品中擴(kuò)增出現(xiàn)了97bp的目的條帶，利用第二對(duì)引物在70%雞的糞便樣品中擴(kuò)增出了132bp的目的條帶。說明引物二的靈敏度強(qiáng)于引物一，利用這兩對(duì)引物都能夠示蹤雞糞便中的Faecalibac

5、terium菌，達(dá)到檢測(cè)雞糞便污染水質(zhì)的目的。
　　經(jīng)基因克隆、測(cè)序確定了鴨腸道Faecalibacterium菌16S rDNA的保守序列，并以此設(shè)計(jì)了可針對(duì)性擴(kuò)增鴨腸道Faecalibaterium 16S rDNA的PCR引物。用此引物對(duì)鴨糞便Faecalibacterium菌構(gòu)建了16S rDNA序列文庫(kù)。結(jié)果在200份克隆中找到了四條特異性序列片段，設(shè)計(jì)出了四對(duì)特異性引物。
　　本文研究了Faecalibacter