膿汁與糞便標本中病原菌的檢測-6

1、半固體培養(yǎng)物4支，藥敏試驗培養(yǎng)物4個，微量發(fā)酵管培養(yǎng)物1套。,器材準備,膿汁和糞便標本中病原菌的檢測實驗流程,①培養(yǎng)基的制備,②細菌的分離培養(yǎng),③細菌的純培養(yǎng),④細菌的形態(tài)學檢查,⑤細菌的生化試驗等,⑥細菌的血清學試驗、結果分析→實驗論文撰寫,,,,,,醫(yī)學微生物學實驗綜合性實驗一,膿汁和糞便標本中病原菌的檢測（六）藥敏實驗結果分析糖發(fā)酵、動力實驗結果分析玻片凝集試驗高壓蒸汽滅菌細菌綜合性實驗總結實驗報告撰寫 細菌感染的

2、檢查方法和防治原則（錄像）洗刷,藥敏試驗結果,用尺子量抑菌圈直徑（單位毫米）,,常用藥敏試驗紙片判斷標準P21,抗菌藥物 紙片含藥量 抑菌圈直徑(mm) 耐藥 中度敏感 敏感青霉素G(葡萄球菌)10單位 ≤28 - ≥29頭孢曲松 30微克 ≤19 20～22 ≥23慶大霉素 10微克 ≤1

3、2 13～14 ≥15先鋒霉素Ⅴ 30微克 ≤14 15～17 ≥18鏈霉素 10微克 ≤11 12～14 ≥15四環(huán)素 30微克 ≤14 15～18 ≥19氯霉素 30微克 ≤12 13～17 ≥18磺胺 300微克 ≤12 13～16 ≥17,藥敏試驗結果分析（錄入）,抗菌

4、素藥敏試驗紙片法結果,G+球菌對青霉素和頭孢曲松敏感。 G-桿菌對青霉素耐藥，對頭孢曲松敏感。G+球菌和G-桿菌對廣譜抗菌素慶大霉素都敏感。,糖發(fā)酵、動力試驗結果判斷,糖發(fā)酵試驗結果,微量發(fā)酵管水平放置，觀察結果。,,半固體穿刺培養(yǎng)結果,半固體并列，對光上下移動至合適觀察位置，觀察結果。,,腸道桿菌科各菌屬生化反應鑒別表,葡萄糖 乳糖 麥芽糖 甘露醇 蔗糖 半固體埃希菌屬 ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ √

5、 +志賀菌屬 + √ √ +/- -/+ -沙門菌屬 ⊕/+ - ⊕ ⊕ - + 霍亂弧菌 + - + + + +變形桿菌屬 ⊕ - √ - √ +注： + 產酸或陽性， ⊕ 產酸產氣，- 陰性， +/- 多數(shù)陽性， -/+ 多數(shù)陰性 √ 不確定。

6、,常見腸道感染細菌主要生化反應特征,葡萄糖 乳糖 半固體（動力）大腸埃希菌 ⊕ ⊕ + 福氏志賀菌 + - -傷寒沙門菌 + - +霍亂弧菌 +★ - + 幽門螺桿菌 不分解糖類 +變形桿菌 ⊕ - +★產酸能迅速殺死該菌。,實驗結果錯誤的分析,純培養(yǎng)時，菌落挑錯了、不是單菌落、

7、CFU。無菌操作不嚴格，污染雜菌。接種時未協(xié)調好，接種錯誤。,玻片凝集試驗 Slide Agglutination Test,在適量電解質存在的情況下，顆粒性抗原(細菌)與特異性抗體結合，如果比例合適，則出現(xiàn)肉眼可見的凝集塊，稱為凝集反應。取潔凈的載玻片一張，將磨面近端設為對照區(qū)，滴加生理鹽水15ul。遠端設為試驗區(qū)，滴加福氏志賀菌診斷血清15ul，用接種環(huán)分別取粉紅色菌苔，約1～2個小菌落的菌量，研磨于鹽水或血清內，混合均勻。

8、※載玻片來回傾側，讓菌液充分混 勻，凝集速度更快、結果更清楚?！耗哂洖殛栃?，菌液均勻混濁記為陰性。,研磨成直徑8～10mm的一層薄菌膜。,玻片凝集結果判定,玻片來回傾側數(shù)次，肉眼觀察；2～3分鐘內仍不出現(xiàn)凝集者,可認為陰性(－)。,……;菌液混濁，少量絮狀,25%凝集,陽性(＋)。,……;菌液輕度混濁,絮狀凝集塊較小,陽性(＋＋)。,……;菌液澄清,有明顯絮片,75%凝集,陽性(＋＋＋)。,本次實驗操作，可產生幾十個微生

9、物氣溶膠顆粒。氣溶膠粒徑＞100um沉降很快,＜50um在0.4s內擴散開,＜5um通過呼吸道直接到達肺泡。Pike博士對實驗室感染統(tǒng)計分析結果發(fā)現(xiàn)，不明原因的感染高達82%，大多數(shù)是氣溶膠在空氣中擴散引起的。實驗時應坐穩(wěn)，很專注，不分心，在火焰周圍10～20厘米內操作，保持安靜、有序，盡量少說話，以免感染病原菌。,生物安全警告BIOHAZARD,滅菌,藥敏試驗平板、動力試驗半固體瓊脂、微量糖發(fā)酵管→高壓蒸汽滅菌 ! 器

10、材收攤入柜前，接種環(huán)，接種針必須再次燒灼滅菌！,綜合性實驗一 實驗總結,采用平板劃線分離法，從濃汁標本中分離出金黃色和白色兩種菌落。顯微鏡下，這兩株細菌均為G+球菌，排列不規(guī)則，呈葡萄串狀，是典型的葡萄球菌；結合菌落或菌苔顏色，這兩株葡萄球菌分別是金黃色葡萄球菌和白色葡萄球菌。通過血漿凝固酶試驗鑒別，金黃色葡萄球菌是致病菌。,用伊紅美藍平板，從糞便標本中分離出紫黑色具有金屬光澤和粉紅色半透明菌落。紫黑色菌落是能分解乳糖的大腸埃希菌。

11、粉紅色菌落是不能分解乳糖的致病菌。顯微鏡下，它們都是G-桿菌，散在排列，從形態(tài)上不能鑒別是什么細菌。經糖發(fā)酵試驗，半固體動力試驗，血清學試驗結果鑒定，它們分別是大腸埃希菌和福氏志賀菌。,,,膿汁和糞便標本細菌檢測結果,細菌鑒定的原則及基本方法,必須用純的細菌培養(yǎng)物作鑒定。因為不同的細菌生化反應結果相差較大，而反應結果是以陽性或陰性表示的，一旦用混合菌做生化反應，結果不可分析。鑒定試驗的選擇：測定細菌的實驗方法很多，根據(jù)鑒定目的選擇適當

12、的試驗項目，既能完成鑒定，項目又盡可能少。一般考慮以下幾個問題。選擇有價值的試驗：鑒別兩種細菌選擇的試驗應該其一為陽性，另一為陰性，且陽性和陰性的概率大于90%。否則，試驗無鑒別價值。選擇快速簡便的試驗。因為是常規(guī)實驗室，選擇的方法應快速方便，如鞭毛染色、氧化酶、凝固酶等應為首選方法。鑒定一種細菌如果有幾種特異方法,只選一兩種,多選無價值。測定細菌的一種生物特性可能有幾種不同方法。應該了解所用方法的敏感性，否則會導致錯誤的鑒定。,

13、思考題,如果細菌生化反應結果不佳，原因何在?報告紙片法藥敏試驗結果，是否符合你所鑒定的細菌的藥敏特性?玻片凝集試驗觀察完畢，應將載玻片立即放入消毒缸內，為什么?怎么設計一個實驗，對傷寒沙門菌進行分離和鑒定?,,染色鏡檢生化反應血清學鑒定,雙糖鐵培養(yǎng)基,增菌培養(yǎng),血、骨髓,挑取可疑菌落,SS瓊脂、EMB平板分離培養(yǎng),糞便,常見腸道致病菌的檢查程序P48,,,,,,微生物學檢查,傷寒沙門菌的分離培養(yǎng)標本的采集與病程的關系：第1周

14、取外周血，第1-3周取骨髓液，第2周以后取糞便和尿液。血液和骨髓液：先增菌培養(yǎng)，然后再用血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板、SS瓊脂（黑色菌落）、EMB平板（粉紅色菌落）分離單菌落。糞便：可直接接種于選擇鑒別培養(yǎng)基，如SS瓊脂、EMB平板分離單菌落。取血量：一般以肉湯培養(yǎng)基的1/10為宜。常規(guī)方法為用培養(yǎng)基50ml,取血5～10ml,注入培養(yǎng)瓶中。骨髓為1～2ml。 細菌的純培養(yǎng)必須用純的細菌培養(yǎng)物作鑒定,形態(tài)與染色：革蘭陰性桿菌，有

15、周鞭毛。動力學試驗：細菌自接種部位向四周移動、擴散生長，培養(yǎng)基呈云霧狀或根須狀混濁狀態(tài)。 生化反應：分解葡萄糖只產酸不產氣 ，不發(fā)酵乳糖。,血清學反應：主要有O和H兩種抗原。傷寒沙門菌還有Vi抗原。對沙門菌屬的型和亞型鑒定有重要意義。玻片凝集試驗：定性鑒定細菌純培養(yǎng)物。肥達反應：用已知傷寒沙門菌菌體（O）抗原、鞭毛（H）抗原和甲、乙型副傷寒菌H抗原與患者血清作試管凝集試驗（定量），檢測有無相應抗體及其效價，以輔助診斷傷寒或副傷寒

16、。 正常值：一般是傷寒沙門菌O抗體的凝集效價≥1：80，H抗體凝集效價≥1：160，副傷寒沙門菌H抗體凝集效價≥1：80才有診斷價值。 動態(tài)觀察：若效價逐次遞增或恢復期效價比初期≥4倍者更有意義。,實驗報告,電子版文件命名原則：XX年級專業(yè)-醫(yī)學微生物學-王XX-學號-實驗報告題目實驗目的實驗器材方法與步驟結果與討論以多數(shù)人的實驗結果為基礎。從2種標本獲得4種菌的實驗結果（綜合性實驗一） 。討論是對

17、實驗結果的分析，應客觀、嚴謹，圍繞主題，突出重點。結論應該明確。備注：請課代表將實驗報告按實驗室（授課老師）打包，直接發(fā)送發(fā)給授課老師。,實驗報告,電子版文件命名原則：XX年級專業(yè)-醫(yī)學微生物學-王XX-學號-實驗報告題目實驗目的實驗器材方法與步驟結果與討論以多數(shù)人的實驗結果為基礎。從2種標本獲得4種菌的實驗結果（綜合性實驗一） 。討論是對實驗結果的分析，應客觀、嚴謹，圍繞主題，突出重點。結論應該明確。備注：請

18、課代表將實驗報告按實驗室（授課老師）打包，直接發(fā)送發(fā)給授課老師或 zhangwb@smu.edu.cn。,如何撰寫科研論文,不論人們是否完全贊成“要么發(fā)表、要么銷毀”的格言，但毫無疑問，科學研究的目的就是要把研究成果發(fā)表出來。一般來說，評價科學工作者的工作，主要不是看他們在實驗室內靈巧的操作，也不是看他們在廣闊或狹窄的科學領域內掌握知識的多少，也不是看他們的智能或魅力，而主要是根據(jù)他們所發(fā)表的文章來估量。他們可能由此而成名，或仍然默默無

19、聞。因此，寫出能充分展示自己工作、引起同行注意的論文是一個科研工作者必備的素質。,一項科學實驗，不論它的結果多么驚人，只有到它發(fā)表出來時才算完成。因此對科學工作者來說，他不僅必須“研究”科學，而且必須把科研成果“寫”出來。要寫好一篇科學論文，作者必須準確地知道他要寫的是什么以及為什么要這么寫?？茖W論文是敘述原始研究結果而寫成并發(fā)表的報告。具體地說，一篇公認的原始科學論文，必須是首次公布的，它應提供足夠的資料，以使同行們能夠：(1)

20、評價觀察到的結果；(2)重復實驗；(3)評價推理過程，而且原始科學論文還必須能為人們所接受，基本上可供科學界永久地、不受限制地利用，要有嚴密的思維特性、邏輯性、清晰性和準確性。,科研論文內容P57標題 摘要引言材料與方法結果討論參考文獻,- THE END -,①試管用毛刷，上下、旋轉刷洗內壁和管底。,②字跡用濕紗布，粘去污粉擦拭。,③管口朝向相同，流水沖洗10次。,④洗干凈的試管，倒扣在筐內，晾干。,平皿用紗布，旋轉