兔脛骨延長(zhǎng)不同比例對(duì)腓腸肌適應(yīng)性改建的影響.pdf

1、肢體延長(zhǎng)技術(shù)是應(yīng)用牽張成骨原理解決臨床上肢體短縮畸形的有效手段，相關(guān)基礎(chǔ)研究的發(fā)展使其技術(shù)日益成熟并在臨床上有效廣泛應(yīng)用。牽張成骨過(guò)程常伴有并發(fā)癥出現(xiàn)，如肌肉攣縮、關(guān)節(jié)僵直、牽拉致周?chē)窠?jīng)血管的損傷等。Paley等在1990就提出了肢體延長(zhǎng)中面臨的最大挑戰(zhàn)不是骨，而是骨骼肌。據(jù)檢索國(guó)內(nèi)外對(duì)骨緩慢延長(zhǎng)引起的周?chē)浗M織損傷方面的基礎(chǔ)研究相對(duì)較少，只有深入探索被延伸骨骼肌的損傷修復(fù)機(jī)制，保持在肌肉功能正常前提下才能夠完成肢體延長(zhǎng)的順利進(jìn)程。<

2、br>　　目的：
　　應(yīng)用單臂外固定支架建立兔脛骨骨干截骨延長(zhǎng)的動(dòng)物模型，在脛骨緩慢延長(zhǎng)不同比例的各礦化時(shí)間點(diǎn)觀察被牽拉腓腸肌的組織學(xué)結(jié)構(gòu)變化特點(diǎn)，研究力生長(zhǎng)因子（MGF）、細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子pax7和成肌分化抗原MyoD在該過(guò)程中的表達(dá)變化趨勢(shì)，分析DO中骨骼肌對(duì)牽拉的承受能力，探索牽拉腓腸肌損傷修復(fù)的適應(yīng)性改建過(guò)程中的分子機(jī)制。
　　方法：
　　實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選取成年日本大耳白兔，隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。對(duì)照組僅行截骨術(shù)，不進(jìn)

3、行骨延長(zhǎng)，術(shù)后一周取材腓腸??；實(shí)驗(yàn)組根據(jù)脛骨延長(zhǎng)幅度分為延長(zhǎng)10％組，延長(zhǎng)20%組，延長(zhǎng)30%組，3個(gè)實(shí)驗(yàn)組根據(jù)礦化時(shí)間點(diǎn)各分為5組：礦化0天（延長(zhǎng)終止日，M0）、礦化7天（M7）、礦化14天（M14）、礦化28天（M28）和礦化56天（M56）。各時(shí)間點(diǎn)X線攝片后取材術(shù)側(cè)腓腸肌中段，固定后石蠟包埋切片，行HE染色和特異抗體的組織化學(xué)染色，光鏡下觀察腓腸肌組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化過(guò)程以及MGF、Pax7和Myod在牽拉不同長(zhǎng)度下不同時(shí)相中的表

4、達(dá)變化情況，陽(yáng)性部分進(jìn)行圖像分析，總結(jié)數(shù)據(jù)變化規(guī)律并分析原因。
　　結(jié)果：
　　1.動(dòng)物模型制備技術(shù)的優(yōu)化保證各組實(shí)驗(yàn)材料的順利獲取。根據(jù)取材前X線檢查和動(dòng)物肢體外觀觀察，在脛骨延長(zhǎng)原長(zhǎng)度的20%以下，隨骨延長(zhǎng)幅度的增加，骨痂的形成量在相同礦化時(shí)間會(huì)相對(duì)減少；在相同延長(zhǎng)幅度下，隨礦化期延長(zhǎng)，骨痂逐漸形成并清晰，骨痂量逐漸增多，骨髓腔出現(xiàn)，骨痂愈合。但是延長(zhǎng)增至原長(zhǎng)度的30%，骨痂形成極為緩慢，至D56組仍不能達(dá)到骨的滿意愈合

5、。
　　2.在牽張成骨過(guò)程中，延長(zhǎng)10%和20%組被同期延長(zhǎng)的腓腸肌在牽拉期和礦化早期出現(xiàn)明顯的損傷性改變，隨牽拉長(zhǎng)度增加損傷程度加重，在礦化后期均出現(xiàn)骨骼肌的適應(yīng)性修復(fù)，D56組基本恢復(fù)骨骼肌的正常形態(tài)結(jié)構(gòu)，光鏡下可見(jiàn)明顯的肌纖維結(jié)構(gòu)恢復(fù)正常；但是延長(zhǎng)30%組，腓腸肌經(jīng)過(guò)最大長(zhǎng)度牽拉后出現(xiàn)最嚴(yán)重的損傷表現(xiàn)，并且不可恢復(fù)，無(wú)論骨還是骨骼肌的損傷均為不可修復(fù)狀態(tài)。
　　3.在脛骨延長(zhǎng)不同長(zhǎng)度下的不同時(shí)期，腓腸肌中MGF、Pax

6、7和Myod表達(dá)量不同且有一定的表達(dá)規(guī)律。對(duì)照組中各時(shí)間點(diǎn)腓腸肌MGF、Pax7和Myod表達(dá)均為陰性或弱陽(yáng)性。隨著脛骨延長(zhǎng)的發(fā)生，腓腸肌 MGF的表達(dá)在礦化初始（D0組）即呈現(xiàn)強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，礦化7天表達(dá)下降但仍為陽(yáng)性水平，礦化14天和礦化28天，MGF表達(dá)降低程度明顯，為弱陽(yáng)性或陰性，至礦化56天MGF表達(dá)和對(duì)照組無(wú)差異：Pax-7的表達(dá)變化則在礦化初始（D0組）和礦化7天時(shí)均為強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，礦化14天時(shí)陽(yáng)性表達(dá)減弱，但仍為陽(yáng)性，礦化28

7、天時(shí)表達(dá)降低呈現(xiàn)出陰性或弱陽(yáng)性表達(dá)，至礦化56天與對(duì)照組無(wú)差異；MyoD在礦化0天時(shí)表達(dá)呈陰性，隨礦化時(shí)間延長(zhǎng)至礦化7天出現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)，礦化14天MyoD表達(dá)量達(dá)到峰值，為強(qiáng)陽(yáng)性，隨后表達(dá)緩慢減弱，礦化28天時(shí)呈陽(yáng)性或弱陽(yáng)性表達(dá)，至礦化56天MyoD表達(dá)和對(duì)照組無(wú)明顯差異。
　　結(jié)論：
　　1.動(dòng)物模型需要不斷改進(jìn)才會(huì)獲得成效高的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。骨延長(zhǎng)技術(shù)有一定的限度，超過(guò)限度（大于肢體長(zhǎng)度30%的延長(zhǎng)）的延長(zhǎng)成功性較差。
　

8、　2.適當(dāng)?shù)墓菭坷娱L(zhǎng)比例在緩慢牽拉速率下對(duì)受牽拉損傷的骨骼肌所導(dǎo)致的亞臨床損傷是短暫的并且是可逆的。牽拉損傷的腓腸肌隨礦化時(shí)間的延長(zhǎng)，可以自行得到適應(yīng)性修復(fù)。但在延長(zhǎng)30%或以上，骨骼肌則會(huì)出現(xiàn)不可逆損傷。3.牽張成骨過(guò)程中，MGF、Pax7和Myod的表達(dá)變化和腓腸肌的組織學(xué)變化規(guī)律并不相同，都會(huì)有特定的表達(dá)高峰時(shí)期，后期均會(huì)表現(xiàn)為未損傷前的表達(dá)水平。這種表達(dá)變化趨勢(shì)說(shuō)明作為肌衛(wèi)星細(xì)胞的主要標(biāo)志物，在骨骼肌的適應(yīng)性牽拉損傷修復(fù)過(guò)程中