艾灸調(diào)控實(shí)驗(yàn)性RA模型T細(xì)胞功能的PD-1-PD-L1機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　本研究在中醫(yī)針灸理論的指導(dǎo)下，以“PD-1/PD-L1信號(hào)通路—T細(xì)胞功能—抗炎效應(yīng)”為研究主線，選擇PD-1、PD-L1為研究切入點(diǎn)，緊扣RA免疫反應(yīng)之“因”和滑膜炎癥病理反應(yīng)之“果”這兩個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)，運(yùn)用免疫組化、Elisa等方法技術(shù)，探索艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA模型T細(xì)胞功能的影響及其PD-1/PD-L1負(fù)性調(diào)控機(jī)制，深化灸法治療RA的作用機(jī)理研究。
　　方法：
　　以日本大耳白兔30只作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，隨機(jī)分為正

2、常對(duì)照組（簡(jiǎn)稱(chēng)“對(duì)照組”）、RA模型組（簡(jiǎn)稱(chēng)“模型組”）、艾灸治療組（簡(jiǎn)稱(chēng)“治療組”），10只動(dòng)物/組。將弗氏完全佐劑（CFA）按0.5mL/kg體重的劑量注入模型組和治療組各家兔的雙后膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)建立RA模型。從實(shí)驗(yàn)第8天開(kāi)始對(duì)治療組各家兔采用艾炷灸“腎俞”、“足三里”穴進(jìn)行治療，每穴連續(xù)施灸5壯，1次/d，6d為1療程，總計(jì)3療程，療程之間休息1d。分別于實(shí)驗(yàn)第1、7、14、21、28天觀察RA家兔的整體狀況、膝關(guān)節(jié)周長(zhǎng)，光鏡下觀察滑

3、膜組織炎癥病理形態(tài)；于實(shí)驗(yàn)第28天，進(jìn)行滑膜組織、滑膜液、脾臟、血清樣本采集，使用Elisa雙抗夾心法檢測(cè)滑膜液中T細(xì)胞促炎因子IL-2、IFN-γ、IL-17含量以及血清中p56lck和p59fyn的含量，采用S-P免疫組化法檢測(cè)脾臟組織mPD-1、mPD-L1的蛋白表達(dá)，使用Elisa雙抗夾心法檢測(cè)血清和滑膜液sPD-1、sPD-L1的含量，采用S-P免疫組化法檢測(cè)滑膜組織中NF-κBp65、IKKβ的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：<

4、br>　　1．艾灸可以明顯改善RA家兔全身狀況和關(guān)節(jié)滑膜炎癥病理變化，顯著降低膝關(guān)節(jié)腫脹。
　　2．滑膜液T細(xì)胞促炎因子含量檢測(cè)結(jié)果顯示：與對(duì)照組比較，模型組IL-2、IFN-γ、IL-17含量均顯著升高(P<0.01)；與模型組比較，治療組IL-2、IFN-γ、IL-17含量均明顯降低(P<0.05)。
　　3．血清中T細(xì)胞識(shí)別信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)激活的相關(guān)分子檢測(cè)結(jié)果顯示：與對(duì)照組比較，模型組血清中p56lck、p59fyn含量均明

5、顯升高(P<0.05)；與模型組比較，治療組血清中p56lck、p59fyn含量均明顯降低(P<0.05)。
　　4．脾臟組織中mPD-1、mPD-L1表達(dá)檢測(cè)結(jié)果顯示：與對(duì)照組比較，模型組mPD-1、mPD-L1的蛋白表達(dá)均明顯升高(P<0.05)；與模型組比較，治療組mPD-1表達(dá)有上升趨勢(shì)(P>0.05)，mPD-L1表達(dá)明顯升高(P<0.05)。
　　5．血清和滑膜液中sPD-1、sPD-L1表達(dá)檢測(cè)結(jié)果顯示：與對(duì)照

6、組比較，模型組血清和滑膜液sPD-1和sPD-L1含量均明顯升高(P<0.05，P<0.01)；與模型組比較，治療組血清和滑膜液sPD-1含量均明顯降低(P<0.05)，血清和滑膜液sPD-L1均呈下降趨勢(shì)，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　6．滑膜組織中NF-κB通路相關(guān)分子檢測(cè)結(jié)果顯示：與對(duì)照組比較，模型組滑膜組織中NF-κBp65、IKKβ的蛋白表達(dá)均明顯升高(P<0.05)；與模型組比較，艾灸組NF-κBp65和IKKβ