雞卵泡體細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組研究及芳香化酶基因調(diào)控分析.pdf

1、卵巢發(fā)育是一個(gè)受多因子調(diào)控的動(dòng)態(tài)過程。實(shí)驗(yàn)證明，哺乳動(dòng)物和禽類的卵巢發(fā)育過程在卵巢雌激素調(diào)控方面存在差異。芳香化酶（CYP19A1）是雄激素轉(zhuǎn)化為雌激素所需要的重要限速酶。本研究將圍繞雞卵泡顆粒細(xì)胞層以及膜細(xì)胞層，通過高通量測(cè)序技術(shù)檢測(cè)雞小黃卵泡中各細(xì)胞層轉(zhuǎn)錄組情況，利用生物信息學(xué)技術(shù)分析雞卵泡顆粒細(xì)胞層與膜細(xì)胞層基因表達(dá)特點(diǎn);并運(yùn)用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)與牛卵泡顆粒細(xì)胞層與膜細(xì)胞層轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，通過基因表達(dá)模式篩選出雞卵泡中可能調(diào)控芳香

2、化酶基因的潛在轉(zhuǎn)錄因子，并通過雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)對(duì)候選轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行驗(yàn)證。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)通過對(duì)雞卵泡各時(shí)期各細(xì)胞層CYP19A1表達(dá)譜的結(jié)果分析，發(fā)現(xiàn)芳香化酶在雞卵泡膜細(xì)胞層中高表達(dá)，并且在小黃卵泡時(shí)期表達(dá)量最高;
　　(2)對(duì)雞小黃卵泡膜細(xì)胞層以及顆粒細(xì)胞層進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，通過分析得到膜細(xì)胞層特異表達(dá)基因179個(gè)，膜細(xì)胞層偏好表達(dá)基因196個(gè)，顆粒細(xì)胞層特異表達(dá)基因18個(gè)，顆粒細(xì)胞層偏好表達(dá)基因39個(gè);

3、>　　(3)通過對(duì)雞小黃卵泡階段與牛卵泡分化及卵泡選擇兩個(gè)階段分別進(jìn)行共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建、通過對(duì)比發(fā)現(xiàn)雞小黃卵泡階段基因表達(dá)模式與牛卵泡分化期更為接近;對(duì)雞共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)進(jìn)一步分析，發(fā)現(xiàn)兩個(gè)與芳香化酶表達(dá)高度相關(guān)的基因模塊;
　　(4)通過對(duì)牛與雞相似卵泡發(fā)育階段基因表達(dá)模式的比較與篩選，確定ESR2為調(diào)節(jié)雞卵泡芳香化酶基因的候選轉(zhuǎn)錄因子;
　　(5)在細(xì)胞水平，通過雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)驗(yàn)證ESR2對(duì)CYP19A1啟動(dòng)子片段活性有抑