斜帶石斑魚P450芳香化酶基因啟動子活性分析.pdf

1、芳香化酶—細胞色素P450芳香化酶(cyp19基因編碼)和NADPH細胞色素P450還原酶組成的酶的復(fù)合物，是雄激素轉(zhuǎn)變?yōu)榇萍に剡^程中的關(guān)鍵酶。在大多數(shù)硬骨魚中存在著兩種cyp19基因，編碼了兩種不同結(jié)構(gòu)和功能的芳香化酶亞型，在性別分化、生殖周期的調(diào)控、雄性魚類的繁殖行為等方面有重要的作用。目前對于魚類cyp19基因的調(diào)控機制還不清楚，本文主要是研究斜帶石斑魚cyp19基因啟動子的活性及調(diào)控方面。 用rVista在線軟件對實驗室

2、已獲得的斜帶石斑魚啟動子的保守性進行pairwise比對分析，結(jié)果表明斜帶石斑魚cyp19ala和cyp19alb基因的近端啟動子在硬骨魚類中具有較高的保守性。在cyp19alb近端啟動子上都具有RFX，STATI，ERE結(jié)合位點；而在cyp19ala啟動子上則具有FOXO家族結(jié)合位點。 本文通過構(gòu)建斜帶石斑魚cyp19alb和cyp19ala啟動子系列缺失的熒光素酶報道質(zhì)粒，分別轉(zhuǎn)染C6(大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞)和TM4(小鼠精巢

3、支持細胞)細胞，分析了啟動子的轉(zhuǎn)錄活性。結(jié)果表明：在TM4細胞中，cyp19ala基因啟動子—246/-112區(qū)域?qū)ζ浠钚跃哂忻黠@的誘導(dǎo)作用，—541/—246區(qū)域?qū)ζ浠钚杂忻黠@的抑制作用；在C6細胞中，cyp19alb基因啟動子—289/—202區(qū)域?qū)ζ浠钚跃哂忻黠@的誘導(dǎo)作用，—921/—378區(qū)域?qū)ζ浠钚跃哂忻黠@的抑制作用。 本文對cyp19ala啟動子上保守的FTZ—F1和SRY位點功能進行了探討。突變近端啟動子上的FTZ

4、—F1位點明顯降低啟動子活性，而突變SRY位點明顯提高啟動子活性，說明FTZ—F1位點對cyp19ala啟動子活性有正調(diào)控作用，而SRY位點有負調(diào)控作用。 為了分析實驗室已克隆到的斜帶石斑魚FTZ—F1和Sox11b是否能調(diào)節(jié)cyp19ala的轉(zhuǎn)錄，本文將FTZ—F1和Sox11b的編碼區(qū)克隆到pcDNA3.0表達載體中，然后同cyp19ala啟動子報道質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染。結(jié)果表明：FTZ—F1在TM4細胞和COS—7細胞中對啟動子沒有