CatSper3、SEPT7與特發(fā)性弱精子癥關(guān)系的研究.pdf

1、精子是大自然創(chuàng)造的神奇的細(xì)胞，它唯一的功能就是獲得動(dòng)能，尋找到卵細(xì)胞，并且與卵細(xì)胞結(jié)合，形成受精卵。像其它很多特殊和復(fù)雜的人類器官和細(xì)胞一樣，精子也含有許多特殊的成分和元件來完成自身的生物合成。通常來說，人類，小鼠等等哺乳動(dòng)物儲(chǔ)存的精子處于沉默狀態(tài)，通過射精使精子進(jìn)入生殖道，噴射出的精子在生殖道強(qiáng)制成熟，獲得動(dòng)能，稱為“精子獲能”，進(jìn)而完成最終受精過程，形成受精卵。
　　近年來，隨著男性科學(xué)研究的不斷深入和發(fā)展，精液形態(tài)和功能檢查

2、越來越普及，同時(shí)，精液質(zhì)量和功能也成為人們?cè)絹碓疥P(guān)注的問題。男性不育與男性精液質(zhì)量密切相關(guān)，任何因素導(dǎo)致的男性精液質(zhì)量都可能引起男性不育，其中精子活力低下就是引起男性精液質(zhì)量下降的一個(gè)因素。精子活力低下稱為弱精子癥（asthenozoospermia AZS）。世界衛(wèi)生組織（World Health Organization， WHO）在2010年給出標(biāo)準(zhǔn)，將精子運(yùn)動(dòng)能力分為三個(gè)等級(jí)：精子的前向運(yùn)動(dòng)（Progressive Motili

3、ty PR），指精子的快速或者緩慢的前向運(yùn)動(dòng)；精子的非前向運(yùn)動(dòng)（Non- Progressive Motility NP），指精子的原地運(yùn)動(dòng)；精子不活動(dòng)（Immotility IM）。正常精液的精子前向運(yùn)動(dòng)率（PR）≥32％，精子密度（Sperm Density）≥15×106/mL。精液中的精子前向運(yùn)動(dòng)率（PR）＜32%，精子密度≥15×106/mL就稱為弱精子癥。弱精子癥成因復(fù)雜，導(dǎo)致弱精子癥的原因有很多，如染色體異常、感染、精液液

4、化不良、精索靜脈曲張等，原因不明的弱精子癥稱為特發(fā)性弱精子癥（Idiopathic Asthenozoospermia）。
　　弱精子癥引起的男性不育成為男性科學(xué)中重要的課題之一，研究弱精子癥的發(fā)病機(jī)制和尋求治療途徑成為無法規(guī)避的難題。目前與弱精子相關(guān)的因子家族有很多，研究這些因子的蛋白分子通路和這些因子在弱精子癥的發(fā)生發(fā)展中的作用有利于揭示弱精子的病因，并為臨床提供治療依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)利用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（ Reverse Tr

5、anscription-PCR， RT-PCR）和蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)（Western Blot）分別檢測(cè)正常精子和弱精子癥中CatSper3、SEPT7的表達(dá)，證明 CatSper3、SEPT7的表達(dá)與弱精子癥的聯(lián)系，為弱精子癥的研究提供更多的依據(jù)。
　　材料與方法
　　1研究對(duì)象
　　標(biāo)本收集：弱精子癥標(biāo)本來自于2015年9月~12月期間鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院男科門診的病人，正常對(duì)照組是各項(xiàng)檢查合格者的精液標(biāo)本，來自于鄭

6、州大學(xué)第三附屬醫(yī)院河南省人類精子庫的供精者。兩組精液間的年齡、精液量、PH、液化時(shí)間等各項(xiàng)精液指標(biāo)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。受試者禁欲2~7天，手淫法收集精液至無菌杯中，37℃孵育，60min內(nèi)液化完全。兩組各采集30例標(biāo)本。正常對(duì)照組濃度≥60×106/mL，PR≥32%，弱精子組濃度≥60×106/mL，PR＜32%。
　　2方法
　　2.1 RT-PCR
　　弱精子癥和正常男性精子（對(duì)照組）中CatSper3和SEPT7

7、mRNA的表達(dá)采用RT-PCR進(jìn)行檢測(cè)。
　　2.2 Western Blot
　　弱精子癥和正常男性精子（對(duì)照組）中CatSper3和SEPT7蛋白的表達(dá)采用Western Blot蛋白免疫印跡法進(jìn)行檢測(cè)。
　　3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS22.0軟件。結(jié)果中計(jì)量的資料數(shù)據(jù)以?x?s表示，對(duì)正常對(duì)照組和弱精子組精液基本參數(shù)、mRNA和蛋白表達(dá)采用兩獨(dú)立樣本 t檢驗(yàn)進(jìn)行分析，精子前向運(yùn)動(dòng)能力與Cat

8、Sper3和SEPT7表達(dá)的相關(guān)性采用Pearson相關(guān)系數(shù)(r)進(jìn)行描述。α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　結(jié)果
　　1兩組精子中CatSper3 mRNA的表達(dá)
　　正常對(duì)照組和弱精子癥組中CatSper3 mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為：1.04±0.33、0.55±0.17，與正常對(duì)照組相比，特發(fā)性弱精子癥患者精子中CatSper3 mRNA的表達(dá)顯著降低（t=7.321, P＜0.01）。
　　2兩組精子中的Ca

9、tSper3蛋白表達(dá)
　　正常對(duì)照組和弱精子癥組中CatSper3蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別為：0.81±0.08、0.41±0.11，與正常對(duì)照組相比，特發(fā)性弱精子癥患者精子中CatSper3蛋白的表達(dá)顯著降低（t=15.298, P＜0.01）。
　　3兩組精子中SEPT7 mRNA的表達(dá)
　　正常對(duì)照組和弱精子癥組中SEPT7 mRNA的相對(duì)表達(dá)量分別為：0.81±0.08、0.52±0.06，與正常對(duì)照組相比，特發(fā)性

10、弱精子癥組精子中SEPT7 mRNA的表達(dá)顯著降低（t=14.930，P＜0.01）。
　　4兩組精子中SEPT7蛋白的表達(dá)
　　正常對(duì)照組和弱精子癥組中SEPT7蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別為：0.79±0.09、0.47±0.11，與正常對(duì)照組相比，特發(fā)性弱精子癥組精子中SEPT7蛋白的表達(dá)顯著降低(t=11.840，P＜0.01）。
　　5 CatSper3、SEPT7在精子中表達(dá)水平與精子前向運(yùn)動(dòng)的相關(guān)性
　　精

11、子前向運(yùn)動(dòng)能力與CatSper3 mRNA和蛋白表達(dá)水平（ r=0.620,P＜0.01;r=0.830，P＜0.01）、SEPT7 mRNA和蛋白表達(dá)水平（r=0.806,P＜0.05; r=0.776， P＜0.05）分別具有相關(guān)性。
　　結(jié)論
　　CatSper3作為精子鈣離子通道蛋白的家族成員之一，在精子中表達(dá)下降可能引起鈣離子通道失衡，精子無法獲能，導(dǎo)致精子活力下降。SEPT7作為Septin家族成員之一，是精子環(huán)