三種藥用石斛代謝譜的初步構建與分析.pdf

1、本文建立了三種藥用石斛GC-MS樣品制備方法，運用該方法對三種藥用石斛試管苗、栽培苗以及石斛加工品楓斗進行分離鑒定，并采用多元統(tǒng)計學方法對數(shù)據(jù)進行處理與分析，目的是通過研究石斛中糖、醇、有機酸、氨基酸等代謝產(chǎn)物的組成及含量變化，初步構建石斛的代謝譜，并獲取對供試樣品分型貢獻值較大的代謝物信息（VIP），結合統(tǒng)計學t檢驗P值（P<0.05），找出生物標志物，可作為石斛品種鑒定與質量控制的依據(jù)之一。實驗建立了藥用石斛甲醇/水相的代謝譜分析技

2、術平臺，為深入研究石斛藥用成分的代謝提供了重要的技術手段。
　　主要的實驗結果如下：
　　1、基于氣相色譜與質譜聯(lián)用（GC-MS）技術，對石斛樣品甲醇/水相提取物制備方法進行了優(yōu)化，結果為：超聲30min，肟化時間120min，肟化溫度37℃,肟化試劑（鹽酸羥胺）用量60μL，衍生化時間90min，衍生化溫度25℃，衍生化試劑（99％BSTFA+1%TMCS）用量60μL。
　　2、石斛樣品甲醇/水相提取物主要為糖類和

3、糖苷類、氨基酸類、脂肪酸類、有機酸類、糖醇類等，氯仿相提取物主要為烷烴類、脂肪酸類、烷醇類等。
　　3、三種藥用石斛甲醇/水相提取物代謝譜分析結果如下：
　?。?）在不同品種的石斛試管苗莖（銅皮石斛、鐵皮石斛、米斛）中，總含糖量的高低為米斛>鐵皮石斛>銅皮石斛，總氨基酸含量也有差異，分別是鐵皮石斛>銅皮石斛>米斛。
　　（2）在一至三年生栽培鐵皮石斛莖中，總的氨基酸含量變化明顯，分別是一年生>兩年生>>三年生；在一至四

4、年生栽培米斛莖中，總氨基酸含量三年生莖中最高；比較不同品種栽培石斛，總糖類差異明顯，為栽培米斛>>栽培鐵皮石斛。
　　（3）在不同品種的石斛加工品楓斗（銅皮楓斗、鐵皮楓斗、米斛楓斗）中，總含糖量高低為米斛楓斗>銅皮楓斗>>鐵皮楓斗，總氨基酸含量為米斛楓斗≈鐵皮楓斗>銅皮楓斗。
　?。?）在不同生產(chǎn)階段（試管苗、栽培苗、石斛加工品楓斗）的米斛中，總含糖量差異明顯，結果為栽培米斛>米斛加工品楓斗>>米斛試管苗。在不同生產(chǎn)階段的鐵

5、皮石斛中，脯氨酸含量差異明顯，鐵皮石斛試管苗>>鐵皮石斛加工品楓斗>鐵皮石斛栽培苗。
　　4、三種藥用石斛甲醇/水相提取物的生物標志物，結果如下：
　?。?）對不同品種石斛試管苗莖中的代謝物進行了研究，找出的生物標志物是鳥氨酸、檸檬酸。
　?。?）對石斛栽培苗莖中的代謝物進行了研究，其中在不同生長年限的鐵皮石斛栽培苗莖中找出了六種生物標志物，分別為甘露糖、半乳糖、氨基甲酸、琥珀酸、肌醇、齊墩果腈。在不同品種（鐵皮石斛、

6、米斛）的石斛栽培苗中，生物標志物是蔗糖、D-甘露糖、 D-葡萄糖、D-果糖、D-山梨糖。
　?。?）對不同品種石斛加工品楓斗的代謝物進行了研究，找出的生物標志物是蔗糖、D-甘露糖、 D-葡萄糖、D-果糖、D-阿洛酮糖、D-塔格糖、琥珀酸、肌醇、丙烯酸、甘油。
　?。?）對不同生產(chǎn)階段石斛（試管苗、栽培苗、石斛加工品楓斗）的代謝物進行了研究，其中不同生產(chǎn)階段的鐵皮石斛莖中生物標志物是十八酸、十六酸、齊墩果腈、丁二酸、氨基甲酸、