大腸桿菌QseB-QseC信號途徑影響染色體復制起始和細胞運動.pdf

1、大腸桿菌QseB/QseC二組分信號系統(tǒng)調(diào)控五十多種鞭毛和細胞毒性相關蛋白的表達。在本研究中，發(fā)現(xiàn)無論是在LB還是ABTGcasa培養(yǎng)基中，qseB基因缺失均會導致染色體復制起始提前;在突變體中轉入pqseB質(zhì)粒過表達QseB蛋白后，復制起始提前的現(xiàn)象均被恢復。qseB基因缺失會增加細胞中DnaA蛋白濃度;純化的QseB蛋白在體外不與oriC相互作用。在△qseC突變體細胞中也存在復制起始提前的現(xiàn)象。這些結果說明QseB/QseC信號途

2、徑的缺失會提高細胞中DnaA蛋白濃度，因此引起復制起始的提前。有趣的是，QseB蛋白靶基因fliM、fliQ、fliP或fliO的缺失引起復制起始延遲。還發(fā)現(xiàn)，QseB/QseC信號途徑的缺失不影響細胞大小，而鞭毛相關基因的缺失卻會影響細胞大小，說明細胞運動影響細胞分裂。熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)QseC蛋白定位在細胞膜上，QseB蛋白定位在細胞質(zhì)中。
　　qseB基因的缺失會大大提高細胞的運動能力，相反，突變體中過表達QseB蛋白使細胞

3、運動能力恢復至野生型。然而，在△qseC和△flhDC突變體細胞中，細胞的運動能力明顯的減弱，說明QseC信號因子、FlhD和FlhC轉錄因子對于細胞正常的運動是必需的。正如所期待的，鞭毛基因的缺失會導致細胞運動能力的減弱。
　　GFP-QseB免疫共沉淀實驗表明，QseB在體外與伴侶蛋白DnaK和細胞分裂蛋白FtsZ有相互作用。通過細菌雙雜交實驗驗證了QseB在體內(nèi)確實與DnaK和FtsZ蛋白有相互作用。有趣的是，DnaK缺失或