糖尿病腎病相關(guān)microRNA表達(dá)譜及l(fā)et-7a基因啟動(dòng)子調(diào)控區(qū)域多態(tài)性的研究.pdf

1、第一部分Ⅱ型糖尿病及糖尿病腎病相關(guān)microRNA表達(dá)譜的研究
　　目的：用生物信息學(xué)方法，富集和篩選Ⅱ型糖尿病(DM)中相關(guān)的微小RNAs(microRNAs，miRNAs);應(yīng)用MicroRNA微陣列芯片檢測(cè)技術(shù)建立糖尿病腎病(DN)循環(huán)miRNA表達(dá)譜，并與DM中miRNA表達(dá)譜相比較，找出在DM及DN中均異常表達(dá)的miRNAs。
　　方法：從GEO數(shù)據(jù)庫(kù)中下載5套基因芯片數(shù)據(jù)集，應(yīng)用TIGRMultiExperime

2、nt Viewer(MEV:version4.9)軟件對(duì)其原始數(shù)據(jù)進(jìn)行重新整合，SAM軟件統(tǒng)計(jì)出DM相關(guān)芯片數(shù)據(jù)集中表達(dá)差異的miRNAs;應(yīng)用μ ParafloTM microRNA微陣列技術(shù)檢測(cè)DM及DN患者血液差異表達(dá)的miRNAs;選擇在DM及DN相關(guān)miRNA表達(dá)譜中均表達(dá)異常的let-7a，進(jìn)行定量RT-PCR驗(yàn)證。
　　結(jié)果：生物信息學(xué)方法共富集了18個(gè)在4套及以上芯片數(shù)據(jù)集中均有表達(dá)差異的DM相關(guān)miRNAs。Mi

3、croRNA微陣列芯片檢測(cè)到49個(gè)miRNAs在DN中差異表達(dá)。其中，let-7a在DM中上調(diào)，但在DN中為顯著下調(diào)的miRNA，通過定量RT-PCR檢測(cè)let-7a的表達(dá)水平，結(jié)果與芯片表達(dá)譜中趨勢(shì)一致。
　　結(jié)論：DM及DN相關(guān)miRNA表達(dá)譜的建立可能為尋找診斷和治療DN中特異敏感的新型潛在生物學(xué)標(biāo)記提供思路。在DM及DN中均表達(dá)異常的miRNA let-7a，可能參與調(diào)控糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展。
　　第二部分 let-

4、7a基因啟動(dòng)子調(diào)控區(qū)域多態(tài)性與糖尿病腎病的相關(guān)性
　　目的：通過對(duì)let-7a基因啟動(dòng)子調(diào)控區(qū)域多態(tài)位點(diǎn)的進(jìn)行基因分型，評(píng)估let-7a調(diào)控區(qū)域單核甘酸多態(tài)性(SNP)對(duì)糖尿病腎病的易感性。
　　方法：生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)并篩選三個(gè)位于let-7a前體(let-7 a-2)啟動(dòng)子調(diào)控區(qū)域標(biāo)簽SNP(tag SNP)，采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP-PCR)法對(duì)108例糖尿病腎病(DN)、104例Ⅱ型糖尿病(

5、DM)患者及62例健康人對(duì)照(CON)三個(gè)SNP進(jìn)行基因分型并測(cè)序驗(yàn)證。
　　結(jié)果：let-7a基因調(diào)控區(qū)域rs1143770多態(tài)位點(diǎn)的CT雜合子基因型在DN、DM、CON三組間有顯著差異(P＜0.05)，且在DM組和DN組CT+TT兩基因型均依次較CON組顯著升高(P=0.049; P=0.001)。
　　結(jié)論：miRNA let-7a啟動(dòng)子調(diào)控區(qū)rs1143770多態(tài)與中國(guó)漢族人群糖尿病腎病相關(guān)，可能是個(gè)潛在的功能位點(diǎn)。