2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、第一部分、建立早期糖尿病腎病循環(huán)miRNA指紋譜
  目的:建立早期糖尿病腎病(Diabetic nephropathy,DN)循環(huán)microRNA(miRNA)指紋譜,為糖尿病腎病的早期分子診斷和治療提供依據。
  方法:使用PAXgeneTM blood RNA tubes采集早期糖尿病腎病和糖尿病(Diabetes mellitus,DM)患者的新鮮血液各3例,Trizol法提取總RNA,YM-100微離心過濾柱富集片

2、段小于300 nt的小RNA,經過修飾處理后與含有最新版本探針序列(Version10.0 microRNA數據庫,http://microrna.sanger.ac.uk/sequences/)的RNA芯片雜交和特異性的熒光染料染色,經過軟件分析和數據處理后,獲得早期糖尿病腎病和糖尿病的差異表達譜。通過TaqMan(@)MicroRNA Assays定量RT-PCR試劑盒對6個樣本中的let-7a的表達水平進行定量檢測,驗證RNA芯片

3、結果的可靠性。
  結果:RNA芯片檢測結果顯示早期糖尿病腎病和糖尿病血液中的miRNA有22個差異表達較明顯的,通過比較共篩選出10個糖尿病腎病顯著差異miRNAs,其中表達上調的miRNAs為5個,分別是hsa-miR-4429、 hsa-miR-4454、 hsa-miR-320e、 hsa-miR-320b和hsa-miR-320d,表達下調的miRNAs為5個,分別是hsa-let-7f、hsa-miR-363、hsa-

4、let-7a、hsa-let-7d、hsa-miR-26a。通過定量RT-PCR檢測了let-7a的表達水平,結果與芯片結果一致,表明芯片結果是可靠的。
  結論:早期糖尿病腎病和糖尿病患者的部分循環(huán)miRNAs表達具有顯著差異,建立早期糖尿病腎病循環(huán)miRNA指紋譜可能為糖尿病腎病的早期分子診斷和治療提供新的思路。
  第二部分、let-7a-3基因啟動子甲基化對早期糖尿病腎病的調控作用
  目的:檢測早期糖尿病腎病

5、(DN組)、糖尿病(DM組)和正常人(CON組)全血DNA中l(wèi)et-7a-3基因啟動子的甲基化水平,探討基因啟動子甲基化對let-7a表達的影響,為研究調控早期糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展的分子機制提供新的線索。
  方法:熒光定量甲基化特異性PCR(qMSP)檢測DN組、DM組和CON組全血DNA樣本各20例的let-7a-3基因啟動子甲基化率,PCR產物采用瓊脂糖凝膠電泳和克隆測序的方法驗證PCR反應的準確性。
  結果:qMS

6、P法檢測let-7a-3基因啟動子的甲基化水平,顯示DN組平均甲基化率為96.2%,DM組平均甲基化率為76.6%,正常組平均甲基化率為63.2%,經統(tǒng)計分析,DN組平均甲基化率明顯高于DM組和正常組(P<0.05),而DM組和正常組相比,增高并不明顯(P>0.05)。
  結論:早期糖尿病腎病患者let-7a-3基因啟動子的甲基化水平明顯增高,影響let-7a-3基因的表達,使得let-7a的表達量下降(RNA芯片和定量RT-P

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