骨肉瘤miRNA-34a基因啟動子甲基化水平改變及其調(diào)控作用研究.pdf

1、目的：檢測骨肉瘤miRNA-34a啟動子甲基化水平，觀察去甲基化對人骨肉瘤細胞增殖及其miRNA-34a表達的影響，探討骨肉瘤miRNA-34a啟動子甲基化的調(diào)控作用。
　　方法：運用實時定量 PCR（real-time PCR）檢測對比人骨肉瘤細胞株（MG-63、SAOS-2）及成骨細胞株（hFOB1.19）中miRNA-34a的表達差異；采用基質(zhì)輔助激光解吸附電離飛行時間質(zhì)譜分析質(zhì)譜技術(shù)（MALDI-TOF）檢測對比人骨肉瘤細

2、胞與成骨細胞、骨肉瘤蠟塊組織與正常骨組織中miRNA-34a啟動子CpG島甲基化水平的差異；用1%5-氮雜-胞苷（5-Aza-2’-deoxycytidine，Aza）對人骨肉瘤細胞進行去甲基化處理，觀察去甲基化處理后人骨肉瘤細胞生長狀態(tài)，并檢測分析去甲基化處理前后人骨肉瘤細胞中miRNA-34a表達量及其啟動子甲基化水平的變化。
　　結(jié)果： miRNA-34a在MG-63、SAOS-2細胞中的表達量明顯低于hFOB1.19細胞，

3、差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。MG-63、SAOS-2細胞中miRNA-34a基因啟動子CpG島甲基化水平高于 hFOB1.19細胞，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。骨肉瘤組織中miRNA-34a基因啟動子CpG島甲基化水平高于正常骨組織對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；MG-63、SAOS-2細胞經(jīng)去甲基化處理后生長增殖受限，檢測miRNA-34a均表達上調(diào)（P<0.05），且miRNA-34a啟動子CpG島甲基化