分娩發(fā)動(dòng)前后PR啟動(dòng)子區(qū)DNA甲基化水平改變的研究.pdf

1、早產(chǎn)是常見的妊娠并發(fā)癥及新生兒發(fā)病和死亡的主要原因。早產(chǎn)發(fā)病機(jī)理不明,發(fā)生率高。妊娠過程中子宮由靜息狀態(tài)逐漸增加收縮力即分娩啟動(dòng)的機(jī)制目前是臨床研究熱點(diǎn)之一,因此分娩發(fā)動(dòng)機(jī)制的研究顯得較為重要。目前推測(cè)哺乳動(dòng)物分娩啟動(dòng)機(jī)制研究中主要有三種因素相關(guān):黃體溶解、胎盤P450c17羥化酶上調(diào)和孕激素受體功能改變。近年來對(duì)孕激素受體功能改變?nèi)绻δ苄栽屑に爻吠藱C(jī)制的研究較多。
　　孕激素是維持子宮靜息狀態(tài)的重要激素,孕激素有兩種重要的受體即

2、PRA和PRB,且受體之間作用各異。在分娩啟動(dòng)前子宮處于靜息狀態(tài),而分娩時(shí)子宮肌收縮但孕激素水平并未降低反而升高。而功能性孕激素撤退機(jī)制就是指在分娩啟動(dòng)時(shí)孕激素受體之間發(fā)生比例改變,即功能性孕激素撤退使子宮平滑肌由靜息狀態(tài)轉(zhuǎn)為收縮導(dǎo)致分娩發(fā)生。
　　人類孕激素受體(PR)的基因位于11q22-23,長(zhǎng)度大于90kb,包含8個(gè)外顯子,有PRA與PRB兩種分型受體兩種亞型受體。PRA和PRB是兩種生理功能不同的孕激素受體亞型,由于PR

3、A的N端缺少164個(gè)氨基酸,長(zhǎng)度短于PRB,而在這段氨基酸序列中包含有AF3轉(zhuǎn)錄激活區(qū),所以只有PRB有轉(zhuǎn)錄激活的作用,PRA主要是抑制PRB的基因轉(zhuǎn)錄。近期大量研究表明分娩后PRA相對(duì)于PRB表達(dá)升高,強(qiáng)調(diào)了分娩前后孕激素受體亞型比例改變對(duì)于分娩啟動(dòng)機(jī)制的重要性。而在一些孕激素受體表達(dá)的研究中也顯示表觀遺傳即DNA甲基化和組蛋白乙?；梢杂绊懫浔磉_(dá)。DNA甲基化與組蛋白去乙?；够虺聊?表達(dá)下調(diào),而去甲基化與組蛋白乙?；瘎t相反會(huì)激活

4、基因,表達(dá)上調(diào)。在子宮內(nèi)膜癌中,由于PR的DNA超甲基化,使PR基因沉默,表達(dá)下調(diào)。分娩啟動(dòng)研究中表觀遺傳學(xué)的研究尚少,有文章表明分娩子宮肌層中PR啟動(dòng)子區(qū)存在高組蛋白乙?；虷3K4me3,但尚無DNA甲基化與PR表達(dá)相關(guān)分娩啟動(dòng)的研究。那么,在分娩啟動(dòng)前后是否存在PR基因的甲基化狀態(tài)改變使不同受體表達(dá)改變導(dǎo)致分娩的發(fā)生?
　　為了明確分娩啟動(dòng)前后子宮平滑肌孕激素受體的表達(dá)及其甲基化狀態(tài)的改變,本研究選取臨產(chǎn)(IL)孕婦做為研究

5、組,未臨產(chǎn)(NIL)孕婦做為對(duì)照組,活檢取子宮下段肌層組織,通過免疫組化檢測(cè)PR及PRB在子宮肌層中的表達(dá)及定位,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測(cè)子宮肌層中PR、PRB、DNMTs(DNMT1、DNMT3a、DNMT3b)的表達(dá),并結(jié)合臨床資料對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析;同時(shí)通過BSP技術(shù)檢測(cè)分娩前后子宮肌層中PRA及PRB的甲基化狀態(tài);通過分離培養(yǎng)子宮平滑肌細(xì)胞,觀察DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑(5-Aza-dC)對(duì)處理前后子宮平

6、滑肌細(xì)胞孕激素受體表達(dá)的影響,以期了解體外子宮平滑肌細(xì)胞DNA甲基化與PRs表達(dá)關(guān)系。
　　研究結(jié)果顯示,PR和PRB在臨產(chǎn)及未臨產(chǎn)的子宮平滑肌中都有明顯的表達(dá),且定位于細(xì)胞核中。PRA、PRA/PRB在臨產(chǎn)的表達(dá)與未臨產(chǎn)存在顯著差異,PRB在臨產(chǎn)與未臨產(chǎn)無顯著差異,結(jié)果提示PRA表達(dá)升高及PRA/PRB比值升高可能與分娩啟動(dòng)有關(guān)。BSP檢測(cè)PRA和PRB啟動(dòng)子區(qū)的DNA甲基化狀態(tài),結(jié)果顯示:與未臨產(chǎn)妊娠相比,臨產(chǎn)妊娠的子宮平滑肌