?？寺∨甙l(fā)育相關(guān)基因啟動子區(qū)DNA甲基化模式比較研究.pdf

1、胚胎發(fā)育是精卵結(jié)合表觀重編程的過程，DNA甲基化是表觀重編程修飾的一種主要形式，參與細(xì)胞的多種生理活動。DNA甲基化可使參與胚胎發(fā)育的基因有序表達(dá)，維持胚胎的正常發(fā)育。
　　 牛是單胎動物，為提高牛的繁殖力，更多地采用體外培養(yǎng)的方式獲得牛早期胚胎，然后進(jìn)行移植。但由于各種原因，體外胚易發(fā)生早期死亡，其成活率遠(yuǎn)低于體內(nèi)胚，對畜牧業(yè)生產(chǎn)造成一定的損失。
　　 目前已證實(shí)異常的DNA甲基化導(dǎo)致胚胎發(fā)育失敗，因此本文從早期胚胎死

2、亡角度出發(fā)，采用亞硫酸氫鹽測序法，研究與牛早期胚胎發(fā)育相關(guān)基因OCT4、Nanog啟動子區(qū)的甲基化，以揭示與胚胎發(fā)育相關(guān)基因的甲基化模式，推測克隆胚發(fā)育失敗的原因，進(jìn)而預(yù)測早期胚胎死亡的可能信號，提高體外胚的成活率，指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室生產(chǎn)。研究結(jié)果如下：
　　 1.本試驗(yàn)以牛的孤雌胚胎為材料，探討獲得高濃度胚胎基因組DNA的方法。結(jié)果表明：首先使用蛋白酶K除去透明帶，然后用本試驗(yàn)方法可以獲得濃度相對高的基因組DNA。
　　 2.

3、檢測了OCT4基因在不同時期死亡胚胎的甲基化模式。結(jié)果表明OCT4基因在2-細(xì)胞、4-細(xì)胞、8-16細(xì)胞和桑葚胚階段死亡的克隆胚的甲基化水平分別為90.50%、90.00%、92.30%、77.70%，在體外受精胚的2-細(xì)胞、4-細(xì)胞、8-16細(xì)胞、桑葚胚階段死亡的甲基化水平分別為87.80%、81.10%、88，50%、70.60%。表明OCT4基因啟動子在早期死亡胚的甲基化水平較高，且在克隆胚的甲基化水平高于體外受精胚的甲基化水平，

4、但克隆胚和體外受精胚各階段甲基化差異不顯著(P>0.05)；同時克隆胚和體外受精胚OCT4的甲基化水平從8-16細(xì)胞到桑葚胚呈下降趨勢。
　　 3.檢測了Nanog基因在不同時期死亡胚胎的甲基化模式。研究表明Nanog在克隆胚的2-細(xì)胞、4-細(xì)胞、8-16細(xì)胞和桑葚胚階段死亡的甲基化水平分別為46.15%、42.31%、48.46%、53.85%，在體外受精胚的2-細(xì)胞、4-細(xì)胞、8-16細(xì)胞、桑葚胚階段死亡的甲基化水平分別為6

5、3.85%、56.92%、69.23%、53.07%。表明Nanog基因啟動子在早期死亡的體外受精胚的甲基化水平較克隆胚的高；在早期死亡的克隆胚中，Nanog甲基化水平從8-16細(xì)胞到桑葚胚時上升，而在體外受精胚則下降。同時Nanog啟動子在體外受精胚的甲基化水平高于克隆胚。
　　 4.總的來說，早期死亡胚中，OCT4基因啟動子的甲基化高于Nanog的，推測可能由于OCT4異常的甲基化使Nanog發(fā)生異常甲基化，二者異常的甲基化