TRPC1在人氣道上皮內(nèi)的表達(dá)及其意義.pdf

1、研究背景：
　　瞬時受體電位蛋白-1（transientreceptorpotentialcanonical1,TRPC1）是廣泛存在于人體多種細(xì)胞膜及細(xì)胞器膜上一種壓力敏感受體，參與人體內(nèi)多種細(xì)胞的機電換能機制。氣道高壓力與肺功能減損、呼吸道炎癥反應(yīng)、氣道黏液高分泌、氣道重塑等肺臟多種病理生理改變有關(guān)，但其信號傳導(dǎo)機制尚不清楚。因此，我們推測TRPC1蛋白可能是支氣管上皮細(xì)胞內(nèi)感知機械壓力并介導(dǎo)相關(guān)病理改變的重要受體。
　

2、　目的：
　　探討人支氣管上皮細(xì)胞內(nèi)TRPC1蛋白的表達(dá)情況及其在氣道感知機械壓力機制中的作用。
　　方法：
　　1.收集人肺癌患者肺癌旁5cm以外的無病變組織，根據(jù)臨床表現(xiàn)分為正常組、慢性阻塞性肺病組（COPD）和哮喘組，通過細(xì)胞免疫組織化學(xué)、Western-blot方法、實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）證實TRPC1在人支氣管上皮細(xì)胞中的表達(dá)情況，以及各組分布特點；
　　2.16HBE細(xì)胞經(jīng)TRPC

3、1siRNA、NCsiRNA轉(zhuǎn)染技術(shù)實現(xiàn)基因沉默后，通過細(xì)胞免疫熒光技術(shù)、Western-blot檢測沉默效率；
　　3.將16HBE細(xì)胞分組處理：單純刺激組、刺激+TRPC1siRNA轉(zhuǎn)染組、對照組，以細(xì)胞牽張刺激系統(tǒng)處理6min后，激光共聚焦技術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化。
　　結(jié)果：
　　1.COPD組、哮喘組支氣管上皮細(xì)胞內(nèi)TRPC1表達(dá)水平明顯高于對照組（均P<0.05）；
　　2.經(jīng)TRPC1siRNA

4、轉(zhuǎn)染后，16HBE細(xì)胞內(nèi)TRPC1蛋白表達(dá)水平明顯降低（均P<0.01）,經(jīng)NCsiRNA轉(zhuǎn)染后，TRPC1蛋白的表達(dá)水平無明顯變化（P=0.06，P=0.10）；
　　3.單純刺激組細(xì)胞內(nèi)鈣離子熒光強度顯著高于對照組（對照組：0.08±0.007，單純刺激組：0.18±0.008，P<0.01），而刺激+TRPC1siRNA轉(zhuǎn)染組鈣離子熒光強度與對照組無明顯差異（刺激+TRPC1siRNA組：0.09±0.007，P=0.06）