二氧化硫對兔髂動脈再狹窄模型的保護作用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  本實驗通過制備新西蘭兔髂動脈的再狹窄模型,觀察動物模型體內SO2的表達水平,以及髂動脈的病理改變,并加用SO2外源性供體Na2SO3/NaHSO3,以探討SO2在再狹窄發(fā)生及發(fā)展過程中的變化及其與再狹窄的可能內在關聯(lián)及其對PCI術后再狹窄的可能的防治作用。
  研究方法:
  1、制備球囊損傷致髂動脈再狹窄模型:將30只新西蘭雄兔,隨機分成三組,即正常對照組、再狹窄模型組及 SO2干預組。適應性飼喂7天普飼

2、后,取后兩組新西蘭兔實施球囊損傷術,術后連續(xù)飼喂再狹窄模型組及 SO2干預組高脂飼料4周,再次對再狹窄模型組及 SO2干預組行球囊損傷術,手術后繼續(xù)飼喂再狹窄模型組及 SO2干預組高脂飼料,術后第3天 SO2干預組開始腹腔注射Na2SO3/NaHSO3新鮮混合液(摩爾比Na2SO3:NaHSO3=3:1,溶于1 moL/L的9 g/L鹽水中,pH7.4,32.85mg/kg·d)。4周后處死實驗新西蘭兔,處死前抽取靜脈血30ml以測定各

3、項指標,處死后留取髂動脈標本。
  2、靜脈血處理:所有靜脈血標本均測取谷丙轉氨酶(GPT)、谷草轉氨酶(GOT)、膽固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、極低密度脂蛋白(VLDL)、C反應蛋白(CRP)含量,取血清測取SO2、NO、一氧化氮合酶(NOS)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)濃度。
  3、標本處理:留取的雙側髂動脈標本進行HE及免疫組化染色處理;采用RT-

4、PCR技術半定量測定髂動脈組織勻漿中GOT1及GOT2 mRNA的表達水平;于-80℃冰箱中凍存剩余血管組織。
  結果:
  采用本造模方法后,再狹窄模型組及SO2干預組的新西蘭兔存活16只,存活率80%,新西蘭兔處死后均可以觀察到動脈內膜的增生,造模成功。
  1、血清學指標:再狹窄模型組及SO2干預組較正常對照組GOT水平下降(p<0.05),再狹窄模型組低于SO2干預組(p<0.05);再狹窄模型組及SO2干預

5、組較正常對照組CHO、HDL、LDL、VLDL、CRP水平升高(p<0.05),于CRP指標SO2干預組低于再狹窄模型組(p<0.05),于 CHO、HDL、LDL、VLDL指標 SO2干預組略低于再狹窄模型組,無統(tǒng)計學差異(p>0.05);再狹窄模型組與SO2干預組較正常對照組相GPT與TG略有增加,但無顯著差異(p>0.05)。血清SO2含量,SO2干預組高于再狹窄模型組(p<0.05),較正常對照組略增高,但差異無統(tǒng)計學意義(p>

6、0.05);血清NO和eNOS含量再狹窄模型組低于SO2干預組及正常對照組(p<0.05,p<0.05),SO2干預組低于正常對照組(p<0.05);TNOS含量再狹窄模型組高于SO2干預組及正常對照組(p<0.05,p<0.05);SO2干預組高于正常對照組(p<0.05);MDA含量再狹窄模型組高于SO2干預組及正常對照組(p<0.05,p<0.05),SO2干預組高于正常對照組(p<0.05);SOD含量再狹窄模型組低于SO2干預

7、組及正常對照組(p<0.05,p<0.05),SO2干預組低于正常對照組(p<0.05)。
  2、組織學變化:正常對照組的血管管壁質地柔軟,呈粉紅色,HE染色顯示內膜主要成分為單層內皮細胞與內彈力板,中膜平滑肌細胞環(huán)繞管腔規(guī)則排列;再狹窄模型組血管管壁呈白色,質堅韌且厚度增加,血管管腔內徑變窄,HE染色表現(xiàn)為血管內膜明顯增厚,其下含大量增生的血管平滑肌細胞,內彈力板斷裂,中膜處血管平滑肌細胞大量增生。SO2干預組血管質地稍軟且管

8、腔增大,管壁粉白色,HE染色也有不同程度的內膜增厚,較多平滑肌細胞包含其中,內彈力板較完整,中膜亦有增生的血管平滑肌細胞,但較再狹窄模型組其管腔狹窄程度及內膜增生程度降低。通過免疫組化a-平滑肌肌動蛋白(a-SMA)染色提示血管平滑肌細胞是增生內膜的主要細胞組分。在低倍顯微鏡觀察測量三組新生內膜的厚度:與正常對照組(2.9458±0.1646)對比,再狹窄模型組(216.9599±63.7715)、SO2干預組(88.3928±22.8

9、663)血管內膜明顯增厚(p<0.05),SO2干預組內膜較再狹窄模型組變薄(p<0.05)。PCNA染色顯示SO2干預組(20.57±4.07)及再狹窄模型組(41.74±6.52)表達明顯高于正常對照組(14.17±3.65)(p<0.05),而再狹窄模型組與SO2干預組對比表達明顯增高(p<0.05)。
  3、RT-PCR:GOT1及 GOT2mRNA表達水平在再狹窄模型組顯著高于其他兩組(p值均<0.05);SO2干預組

10、 GOT1mRNA表達量略低于空白對照組,但無顯著差異(p>0.05),而GOT2mRNA表達量則降低(p<0.05)。
  結論:
  1、本研究采用聯(lián)合高脂飼料和兔髂動脈二次球囊損傷方法可成功復制再狹窄模型,縮短建模周期,可行性高。
  2、再狹窄的可能發(fā)生機制為:PCI術后致血管內皮受損,致eNOS活性降低,NO生成量減少;內皮抗氧化還原能力受損,SOD活性或生成降低;內皮受損處發(fā)生炎癥反應并釋放一系列炎癥因子。

11、NO含量下降、SOD活性的降低及炎癥因子的釋放進而引起細胞間信息、能量及物質交換增加,VSMC表型改變、增殖遷移,促進以VSMC為主要細胞組分的新生內膜增殖。同時SOD活性降低,以及iNOS生成增加,可引起機體氧自由基數(shù)目增多,脂質過氧化反應加強,MDA等脂質過氧化產物生成增多并加重內皮細胞損傷,最終導致了再狹窄發(fā)生。而SO2可能通過提高eNOS活性,增加NO的釋放;增加機體SOD的含量,減少iNOS生成,降低MDA水平,抑制脂質過氧化

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