神經(jīng)干細(xì)胞移植聯(lián)合促紅細(xì)胞生成素對脊髓損傷大鼠神經(jīng)軸突修復(fù)作用的實驗研究.pdf

1、目的：
　　探討將神經(jīng)干細(xì)胞（NSCs）與促紅細(xì)胞生成素(EPO)聯(lián)合應(yīng)用于橫斷性脊髓損傷大鼠后對脊髓損傷區(qū)神經(jīng)軸突的修復(fù)作用，從而為脊髓損傷患者的臨床治療提供實驗理論依據(jù)。
　　方法：
　　選取健康成年的雌性Wistar大鼠40只，隨機分為對照組、NSCs組、聯(lián)合治療組和EPO組，每組10只大鼠；另外，每組增加3只大鼠以作備用，即每個實驗組大鼠數(shù)為13只，建立T10全橫斷脊髓損傷模型。造模成功后EPO組大鼠腹腔注射促

2、紅細(xì)胞生成素(EPO)，而NSCs組大鼠則在造模成功后立即給予脊髓損傷區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞（NSCs）移植，聯(lián)合治療組大鼠則在造模成功后立即給予脊髓損傷區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞（NSCs）移植，同時給予腹腔注射促紅細(xì)胞生成素(EPO)。應(yīng)用生物素葡聚糖胺（BDA）和熒光金（FG）分別在術(shù)后35 d和46 d進行皮質(zhì)脊髓束順行和逆行追蹤。術(shù)后56 d處死各組實驗大鼠，進行生物素葡聚糖胺（BDA）免疫熒光染色和熒光金（FG）熒光顯微鏡觀察來評估脊髓損傷區(qū)神經(jīng)軸

3、突的再生情況。同時分別在術(shù)后3d、7d、14d、28d、42d和56 d采用BBB評分法評價實驗大鼠后肢運動功能的恢復(fù)情況。多組間樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析,組間比較采用LSD法進行兩兩比較。
　　結(jié)果：
　　生物素葡聚糖胺（BDA）免疫熒光染色顯示：聯(lián)合治療組大鼠脊髓損傷區(qū)可觀察到大量的再生神經(jīng)軸突，其在熒光顯微鏡下發(fā)出紅色熒光，并有一部分再生神經(jīng)軸突穿越損傷區(qū)到達遠(yuǎn)端；NSCs組大鼠脊髓損傷區(qū)僅觀察到有少量的再生神經(jīng)

4、軸突，并沒有觀察到有神經(jīng)軸突通過脊髓損傷區(qū)到達遠(yuǎn)端；EPO組大鼠脊髓損傷區(qū)偶可觀察到有散在的再生神經(jīng)軸突；對照組大鼠脊髓損傷區(qū)則沒有觀察到有明顯的神經(jīng)軸突再生。熒光金（FG）熒光顯微鏡觀察結(jié)果顯示：聯(lián)合治療組大鼠的大腦皮質(zhì)中可觀察到有少量被FG標(biāo)記的錐體細(xì)胞和神經(jīng)軸突，它們在熒光顯微鏡下發(fā)出金黃色熒光，其余3組大鼠的大腦皮質(zhì)中則沒有觀察到被FG標(biāo)記的細(xì)胞和神經(jīng)軸突。BBB評分結(jié)果顯示：脊髓橫斷損傷后3 d各組大鼠的BBB評分均為0分，各

5、實驗組大鼠BBB評分結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)差異；脊髓損傷后7 d、14 d、28 d、42 d和56 d，EPO組大鼠BBB評分結(jié)果與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），NSCs組大鼠BBB評分結(jié)果分別與EPO組及對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；脊髓損傷后7 d、14 d、28 d、42 d和56 d，聯(lián)合治療組大鼠BBB評分結(jié)果分別與其他各組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。術(shù)后56 d各組大鼠后肢運動功能觀察結(jié)果顯示：

6、聯(lián)合治療組大鼠其肢體運動協(xié)調(diào)、規(guī)律，后腳掌可負(fù)重，但無法使軀體抬離地面；NSCs組大鼠肢體運動及協(xié)調(diào)功能欠佳，多數(shù)大鼠后腳趾呈彎曲狀、負(fù)重功能欠佳，僅少數(shù)大鼠后腳掌可負(fù)重；而對照組與EPO組大鼠肢體運動及協(xié)調(diào)功能較差，為不協(xié)調(diào)、無規(guī)律的滑動。
　　結(jié)論：
　　將NSCs移植與腹腔注射EPO聯(lián)合應(yīng)用于脊髓損傷大鼠后可有效促進脊髓損傷大鼠神經(jīng)軸突的再生，進而促進脊髓損傷大鼠后肢運動功能的恢復(fù)；并且NSCs移植聯(lián)合腹腔注射EPO較