重組人促紅細胞生成素聯(lián)合骨髓間充質干細胞移植治療膿毒癥大鼠心肌損傷的實驗研究.pdf

1、目的：本實驗旨在通過研究骨髓間充質干細胞移植聯(lián)合EPO治療膿毒癥大鼠心肌損傷，觀察其對心肌細胞病理學改變及細胞凋亡的影響，探討EPO聯(lián)合骨髓間充質干細胞移植對膿毒癥大鼠心肌細胞凋亡的抑制作用及可能的分子生物機制，從而為臨床治療膿毒癥相關性心肌損傷提供新思路。
　　方法：模型建立：SD大鼠50只，雌雄不拘，隨機分為5組，每組各10只，應用盲腸結扎穿孔術建立膿毒癥模型。單純干細胞移植組（SC）、單純促紅細胞生成素組（EPO）、EPO聯(lián)

2、合SC組（EPO+SC）、膿毒癥組（CLP），假手術組（sham）。SC組建模后尾靜脈輸注異體間充質干細胞。EPO+SC組建模后立即腹腔內注射EPO1000IU/kg并尾靜脈輸注異體間充質干細胞。EPO組模型復制后立即腹腔內注射EPO1000IU/kg，尾靜脈輸注相同容量的生理鹽水。CLP組行盲腸結扎穿孔術，sham組開腹后不做任何處理，后僅尾靜脈輸注相同容量的生理鹽水。檢驗指標：24小時后麻醉處死實驗動物，取心肌標本。采用蘇木精-依紅

3、（HE）染色觀察心肌組織形態(tài)；采用TUNEL染色方法檢測心肌細胞凋亡指數；用Western-blot方法檢測心肌組織中凋亡蛋白Bax、Caspase-3，抗凋亡蛋白Bcl-2的表達量。
　　結果：HE染色：sham組可見心肌細胞排列整齊，心肌細胞結構完整；control組可見廣泛心肌纖維斷裂，排列紊亂，心肌細胞腫脹或皺縮，可見空泡變性;心肌間質血管充血、水腫，炎癥細胞浸潤；EPO組與SC組心肌梗死區(qū)心肌組織相似，炎性細胞浸潤情況較

4、輕，期間散在分布正常心肌細胞；EPO+SC組心肌細胞損害較輕，間質充血不明顯，少量炎癥細胞浸潤。TUNEL結果：EPO+SC組凋亡指數顯著低于CLP組（37.93±12.60％vs75.70±15.50%，p＜0.01），EPO組凋亡指數與EPO+SC組相比較高（54.08±16.06%vs37.93±12.60%，p=0.047），EPO組與SC組凋亡指數均低于CLP組（p＜0.01）。Western blot結果：EPO+SC組Bc