促紅細(xì)胞生成素對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來源微泡修復(fù)腎臟纖維化影響的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:既往研究表明骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal Stem Cells,MSC)在細(xì)胞和組織損傷的修復(fù)中發(fā)揮了重要作用。促紅細(xì)胞生成素(Erythropoietin,EPO)可以提升MSC在組織和器官損傷中的修復(fù)作用。MSC外泌的微囊泡(Microvesicle,MV)可以修復(fù)急慢性腎損傷。因此,進(jìn)一步研究EPO對(duì)MSC外泌的MV在修復(fù)腎臟纖維化方面的影響。
  方法:收集并提取常規(guī)培養(yǎng)條件下MSC來源的MV(MSC-M

2、Vs)和經(jīng)過不同濃度EPO(1,10,100和500 IU/mL)共培養(yǎng)條件下MSC來源的MV(EPO-MVs)。體外實(shí)驗(yàn):轉(zhuǎn)化生長因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)誘導(dǎo)人腎近曲小管上皮細(xì)胞系(HK2)發(fā)生纖維化,并用MSC-MVs和EPO-MVs進(jìn)行干預(yù)治療。運(yùn)用蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測HK2細(xì)胞的表型改變,流式細(xì)胞儀檢測各

3、實(shí)驗(yàn)組HK2細(xì)胞的凋亡情況。體內(nèi)實(shí)驗(yàn):建立單側(cè)輸尿管結(jié)扎模型(UUO)的腎臟損傷模型,MSC-MVs和EPO-MVs干預(yù)治療后通過腎臟組織病理,腎臟纖維化標(biāo)志蛋白改變及腎功能指標(biāo)變化來評(píng)估各實(shí)驗(yàn)組小鼠的腎臟功能。運(yùn)用miRNA的微列陣來檢測MSC-MVs和EPO-MVs內(nèi)各自miRNA表達(dá)譜,尋找出其內(nèi)差異表達(dá)miRNA,并運(yùn)用軟件進(jìn)行靶基因預(yù)測。
  結(jié)果:與常規(guī)培養(yǎng)條件下的MSC組相比,在1-100 IU/mL EPO共培養(yǎng)條

4、件下的EPO-MSC其外泌MV的含量隨著EPO刺激濃度的增加呈現(xiàn)明顯上升的趨勢。100IU/ml EPO濃度下提取的EPO-MVs相較于常規(guī)培養(yǎng)條件下的MSC-MVs在體外TGF-β1誘導(dǎo)HK2纖維化時(shí),EPO-MVs的干預(yù)治療比MSC-MVs有更顯著的效果。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示,MSC-MVs和EPO-MVs均可一定程度上減輕由TGF-β1誘導(dǎo)的HK2細(xì)胞凋亡,并且EPO-MVs的效果更佳。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,最優(yōu)EPO濃度下提取的EPO

5、-MVs在7天和14天對(duì)UUO小鼠的腎臟損傷修復(fù)中呈現(xiàn)了比常規(guī)培養(yǎng)條件下的MSC-MVs更好的治療效果。此外,MSC-MVs和EPO-MVs的miRNA表達(dá)譜對(duì)比分析結(jié)果顯示,EPO-MVs中共有212個(gè)miRNAs表達(dá)發(fā)生變化,其中有70.28%的miRNA是表達(dá)上調(diào)的(包括miR-299a-3p,miR-449b,miR-302b-5p和miRNA-200a-3p)。這些上調(diào)變化的miRNA可能是造成EPO-MVs在腎臟損傷修復(fù)作用

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