紅細(xì)胞生成素對(duì)慢性腎衰竭大鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞動(dòng)員和腎臟修復(fù)的影響.pdf

1、目的:研究促紅細(xì)胞生成素(erythropoietin，EPO)對(duì)慢性腎衰竭(chronic renalfailure，CRF)大鼠外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells，EPCs)的數(shù)目和功能的影響，以及對(duì)腎臟的修復(fù)作用。
　　 方法:采用分階段5/6腎切除術(shù)制備大鼠慢性腎功能衰竭動(dòng)物模型。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為4組：假手術(shù)組(Control)，慢性腎衰竭組(模型組)及rHuEPO干預(yù)的兩個(gè)劑量亞

2、組(小劑量組和大劑量組)。慢性腎衰竭大鼠皮下注射rHuEPO6周后，密度梯度離心法從大鼠心臟血中分離單個(gè)核細(xì)胞，接種于鋪有纖維連接蛋白的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，給予含有血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)等的M199培養(yǎng)基。通過流式檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)記CD34，CD133和KDR以及免疫熒光檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)吞UEA-1和結(jié)合acLDL來(lái)鑒定EPCs，并檢測(cè)EPCs增值、粘附及形成血管結(jié)構(gòu)的能力。用免疫組化檢測(cè)腎組織CD34+細(xì)胞數(shù)目、腎小球CAP內(nèi)皮細(xì)胞密度，用RT-

3、PCR檢測(cè)腎組織eNOS、ET1、TGF-β、COLⅣmRNA的表達(dá)，檢測(cè)Scr、BUN、尿蛋白指標(biāo)并觀察腎組織病理改變。
　　 結(jié)果:內(nèi)皮祖細(xì)胞的鑒定用激光共聚焦顯微鏡觀察，顯示細(xì)胞DiI-acLDL和FITC-UEA-1呈免疫雙熒光陽(yáng)性。應(yīng)用rHuEPO治療能顯著增加殘腎模型大鼠EPC增值、粘附及形成血管結(jié)構(gòu)的能力(P＜0.05)，顯著增加腎組織CD34+細(xì)胞的數(shù)目以及腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞密度(P＜0.05)，上調(diào)腎組織e