2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、慢性腎衰竭(chronicrenalfailure,CRF)是多種慢性腎臟疾病的最終結(jié)果,多并發(fā)腎性貧血、營養(yǎng)不良、骨質(zhì)疏松等癥。貧血被認為是CRF的一個標志。當CRF患者腎小球濾過率(GFR)低于30ml/min時,必然出現(xiàn)貧血,貧血是CRF最常見癥狀之一。CRF并發(fā)貧血使患者生存率降低,增加心血管事件等重要臟器嚴重并發(fā)癥的發(fā)生,嚴重影響了患者的生活質(zhì)量。最近有研究表明對CRF貧血早期進行干預(yù)性治療,可減輕左心室肥厚,改善貧血對重要臟

2、器的損害,有可能改善腎功能,提高患者生活質(zhì)量,因此糾正早期腎性貧血具有十分重要意義。本實驗分兩個部分研究了腎衰養(yǎng)真膠囊對腎性貧血的治療作用。第一部分檢測治療前后大鼠血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、轉(zhuǎn)鐵蛋白(TF)、血紅蛋白(Hb)、促紅細胞生成素(EPO)的水平,測定紅細胞脆性、大鼠紅細胞內(nèi)谷胱甘肽(GSH)含量,比較腎性貧血大鼠的腎臟病理形態(tài),研究腎衰養(yǎng)真膠囊改善腎性貧血大鼠貧血狀態(tài)的機理。第二部分應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(RT

3、-PCR)檢測大鼠髓質(zhì)EPO基因的表達水平,觀察腎衰養(yǎng)真膠囊對EPO基因表達的影響。第一章腎衰養(yǎng)真膠囊對腎衰貧血的改善作用 目的:探討中藥腎衰養(yǎng)真膠囊改善腎衰貧血大鼠的機理。觀察大鼠BUN、SCr、血清鐵、Hb、TF、EPO水平的變化,測定紅細胞脆性、大鼠紅細胞內(nèi)GSH含量,比較腎性貧血大鼠的腎臟病理形態(tài)。 方法:1.購入80只SD雄性大鼠,三天后,預(yù)留10只為正常組,70只參照文獻采用二步法5/6腎切除制作慢性腎衰貧血

4、模型。腹腔注射10%水合氯醛麻醉,皮膚消毒后切開大鼠右腹壁,暴露右腎,切開上、下兩極的包膜,呈放射狀切除右腎上、下兩極,切除約70%,迅速用明膠海綿輕壓在殘留腎的創(chuàng)面后,依次縫合關(guān)腹。10天后經(jīng)左腹壁暴露左腎,血管鉗夾住血管,結(jié)扎,摘除左腎。六周后斷尾取血,經(jīng)全自動生化分析儀檢測血清BUN、Scr和TF,堿化血紅蛋白法測血紅蛋白,留取血清待測血清鐵、EPO含量。符合模型條件的大鼠隨機分為五組,即空白對照組、高劑量組、中劑量組、低劑量組、

5、益血生組。正常組不施加任何影響,空白對照組予蒸餾水灌胃,益血生組予益血生膠囊3g/kg灌胃,高、中、低劑量組大鼠分別給予腎衰養(yǎng)真膠囊16g/kg、8g/kg、4g/kg(生藥含量)灌胃一個月。所有大鼠在整個實驗期間均喂標準飲食,自由進水。治療結(jié)束后,腹主動脈采血,預(yù)留2ml以肝素抗凝,其余分離血清,測定BUN、血Scr、TF、血清鐵、EPO含量。 2.血生化檢測:采用OlimpasAU600自動生化分析儀測BUN、SCr、TF。

6、 3.一般指標檢測:血紅蛋白應(yīng)用堿化血紅蛋白比色法檢測,用紫外分光光度計檢測吸光度換算結(jié)果;全血GSH檢測采用南京建成生物工程研究所的試劑盒,用紫外分光光度計檢測吸光度換算結(jié)果;血清鐵測定采用南京建成生物工程研究所的試劑盒,用紫外分光光度計檢測吸光度換算結(jié)果;血清EPO含量檢測采用酶鏈免疫吸附試驗(ELISA)法(購自美國TPI公司)。 4.紅細胞脆性試驗:參照文獻取抗凝血滴入不同濃度的氯化鈉溶液(2.4g/L,2.8g

7、/L,3.2g/L,3.6g/L,4.0g/L,4.4g/L,4.8g/L,5.2g/L,5.6g/L,6.0g/L),每管一滴,搖勻后靜置4℃冰箱兩個小時,觀察結(jié)果。 5.大鼠腎組織病理學(xué)觀察:實驗?zāi)┙馄蚀笫?,每組選兩只留取殘余腎組織放置10%福爾馬林液中固定,行過碘酸雪夫(PAS)染色。 結(jié)果:1.給藥前后血紅蛋白變化:給藥前模型各組之間血紅蛋白水平無顯著性差異(P>0.05),與正常組比較顯著降低(P<0.01)。

8、給藥后腎衰養(yǎng)真膠囊高、中劑量組血紅蛋白值高于低劑量組、益血生組(P<0.05),高、中劑量組間無明顯差異(P>0.05)。低劑量組、益血生組高于對照組(P<0.05)。表明腎衰養(yǎng)真膠囊高、中劑量改善貧血作用優(yōu)于益血生。 2.給藥前后血清鐵、轉(zhuǎn)鐵蛋白變化:給藥前模型各組之間血清鐵、轉(zhuǎn)鐵蛋白水平無顯著性差異(P>0.05),與正常組比較顯著降低(P<0.01)。給藥后治療各組血清鐵、轉(zhuǎn)鐵蛋白值高于對照組(P<0.05),高、中劑量組

9、和益血生組間無明顯差異(P>0.05),但明顯高于低劑量組(P<0.05)。表明腎衰養(yǎng)真膠囊高、中劑量和益血生有促進鐵吸收、利用的作用。 3.各組間紅細胞脆性比較:正常組脆性小于低劑量組和對照組(P<0.05),治療組間無顯著性差異(P>0.05),低劑量組脆性小于對照組。表明腎衰養(yǎng)真膠囊高、中劑量、益血生有降低紅細胞脆性的作用。 4.各組間血液中GSH含量比較:各組GSH含量明顯高于對照組(P<0.01)。高、中劑量組

10、血液中GSH含量高于低劑量組、益血生組(P<0.05),正常組、高、中劑量組間無顯著性差異(P>0.05)。表明腎衰養(yǎng)真膠囊高、中劑量提高血液中GSH含量的作用優(yōu)于益血生。 5.給藥前后血清EPO水平比較:給藥前模型各組之間EPO水平無顯著性差異(P>0.05),與正常組比較顯著降低(P<0.01)。給藥后,各組血清EPO水平仍顯著低于正常組(P<0.01),但高、中劑量組EPO水平明顯升高,與給藥前有顯著性差異(P<0.01)

11、,低劑量組略升高(P<0.05),益血生組無統(tǒng)計學(xué)差異。高、中劑量組EPO水平高于低劑量組、益血生組(P<0.05),高、中劑量組間無顯著性差異(P>0.05)。低劑量組、益血生組顯著高于對照組(P<0.01)。表明腎衰養(yǎng)真膠囊提高血液中EPO含量的作用優(yōu)于益血生。 6.大鼠腎組織病理結(jié)果比較:模型組大鼠腎小球囊腔及腎小管可見大量蛋白,腎小球血管硬化,纖維化,玻璃樣變,近曲小管上皮細胞內(nèi)玻璃樣變;腎衰養(yǎng)真膠囊高、低劑量組可見腎小

12、球囊腔及腎小管大量蛋白,系模增生,纖維化,近曲小管上皮細胞內(nèi)玻璃樣變,中劑量組腎小球囊腔及腎小管未見蛋白,可見系模增生。益血生組腎小球囊腔可見蛋白,系模增生,纖維化,彌漫性炎癥細胞浸潤。 結(jié)論:1.腎衰養(yǎng)真膠囊和益血生膠囊均可改善腎性貧血,腎衰養(yǎng)真膠囊療效優(yōu)于益血生膠囊,腎衰養(yǎng)真膠囊中劑量組療效為佳。腎衰養(yǎng)真膠囊能提高血清中EPO水平,貧血狀態(tài)改善,病理圖片顯示治療組與對照組相比,大鼠腎小球囊腔及腎小管蛋白顯著減少,腎小球血管硬

13、化、纖維化、玻璃樣變和近曲小管上皮細胞內(nèi)玻璃樣變等損害明顯減輕,表明腎衰養(yǎng)真膠囊具有保護腎小管及管旁毛細血管內(nèi)皮細胞及間質(zhì)細胞,促進合成分泌EPO的作用。 2.腎衰養(yǎng)真膠囊能降低腎性貧血大鼠的紅細胞溶血的液體濃度,說明腎衰養(yǎng)真膠囊能夠增加紅細胞膜的穩(wěn)定性,降低紅細胞脆性,從而延長紅細胞的壽命。 3.腎衰養(yǎng)真膠囊能顯著提高大鼠紅細胞內(nèi)GSH水平,療效優(yōu)于益血生膠囊。說明腎衰養(yǎng)真膠囊通過提高體內(nèi)GSH濃度,增加抗氧化系統(tǒng)活性

14、,降低過氧化物毒性,保護紅細胞免受損傷,達到改善腎衰貧血的目的。 4.腎衰養(yǎng)真膠囊能顯著提高CRF貧血大鼠的血清鐵、轉(zhuǎn)鐵蛋白含量,說明腎衰養(yǎng)真膠囊可以促進鐵劑的吸收,提高鐵的利用。 第二章腎衰養(yǎng)真膠囊對腎衰貧血大鼠EPO基因表達的影響 目的:觀察腎衰貧血大鼠EPO基因表達的變化,探討腎衰養(yǎng)真膠囊對腎衰貧血大鼠EPO基因表達的影響。 方法:1.動物標本采集:實驗?zāi)┙馄蚀笫蠛螅?jīng)4℃預(yù)冷焦碳酸二乙酯(DEPC

15、)水反復(fù)灌洗腎臟,修剪留取腎髓質(zhì)200mg,RNAin液保存于-20℃冰箱中待測。 2.半定量RT-PCR檢測EPO基因的表達:取新鮮凍存腎組織200mg,按Trizol使用說明,提取總RNA,測定其純度和含量。根據(jù)文獻設(shè)計引物序列,EPO:引物1序列為5'-AGGCGCGGAGATGGGGGTGC-3′,引物2序列為5'-CCCCGGAGGAAGTTGGAGTAG-3';β-肌動蛋白(β-actin):引物1序列為5'-GTG

16、GGGCGCCCCAGGCACCA-3',引物2序列為5'-CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC-3',并經(jīng)聯(lián)網(wǎng)檢索geneBank,由上海博亞生物技術(shù)有限公司合成引物序列。取總RNA2μg,用一步法RT-PCR試劑盒獲取目的片段。RT-PCR逆轉(zhuǎn)錄擴增條件:逆轉(zhuǎn)錄30min,預(yù)變15min,然后94℃變性30s,56℃退火30s,72℃延伸1min,30個循環(huán),72℃延伸10min。EPO擴增產(chǎn)物540bp,β-actin

17、擴增產(chǎn)物500bp。最后擴增產(chǎn)物在1.5%瓊脂糖凝膠中電泳,溴化乙錠(EB)染色,于紫外燈下拍照,將膠片上反應(yīng)帶在GelDoc1000凝膠成像分析系統(tǒng)中掃描、打印并分析電泳帶的灰度,將EPO擴增產(chǎn)物和β-actin擴增產(chǎn)物灰度值進行比較。 結(jié)果:各組大鼠RT-PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖電泳,Marker標記片斷為540bp和500bp,符合目的基因長度(圖2-1)。各組間灰度比較,高、中劑量組表達量明顯高于正常組(P<0.01),低

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