促紅細(xì)胞生成素對(duì)新生HIBD大鼠Bcl-2及Bax蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的: 圍生期窒息引起的缺氧缺血性腦損傷(HIBD)，常危及新生兒生命，是導(dǎo)致兒童神經(jīng)系統(tǒng)傷殘的常見原因之一。近年研究發(fā)現(xiàn)，促紅細(xì)胞生成素(EPO)在新生兒HIBD發(fā)病機(jī)制中起重要作用。本實(shí)驗(yàn)通過制備新生大鼠HIBD模型，腹腔注射外源性重組人促紅細(xì)胞生成素(rhEPO)，觀察不同劑量EPO對(duì)新生HIBD大鼠腦組織Bcl-2及Bax蛋白表達(dá)的影響，探討EPO神經(jīng)保護(hù)作用的分子機(jī)制，以期為臨床治療新生兒HIBD提供有效的方法和途徑。

2、 方法: 1．制備HIBD模型：將新生7日齡wistar大鼠行頸部正中切口，分離結(jié)扎左側(cè)頸總動(dòng)脈后給予低氧(8％O<,2>，92％N<,2>)處理2小時(shí)，制成HIBD模型。觀察缺氧時(shí)動(dòng)物行為變化，并于光鏡下觀察腦組織病理改變。 2．行為能力檢查：分別于手術(shù)前及缺氧后1小時(shí)對(duì)每只大鼠進(jìn)行翻身能力、夾尾左旋測(cè)試。 3．Bcl-2及Bax蛋白表達(dá)測(cè)定：42只新生7日齡wistar大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、HIBD組

3、、生理鹽水對(duì)照組、EPO干預(yù)組，其中EPO干預(yù)組又分為大、中小、劑量三組，每組7只動(dòng)物，于缺氧結(jié)束后立即一次性腹腔注射給藥，應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色方法，觀察給藥24小時(shí)后Bcl-2及Bax蛋白表達(dá)變化。 結(jié)果: 1．行為能力檢查術(shù)前每只大鼠均做翻身能力、夾尾左旋測(cè)定，42只全部正常。缺氧后l小時(shí)假手術(shù)組測(cè)定結(jié)果同前。經(jīng)歷缺氧缺血的35只大鼠，19只不能翻身，28只出現(xiàn)夾尾左旋，13只表現(xiàn)不能翻身和夾尾左旋同時(shí)存在。

4、 2．HE染色及光鏡檢查結(jié)果假手術(shù)組：腦組織結(jié)構(gòu)及細(xì)胞層次清楚，神經(jīng)元形態(tài)正常，無腦水腫。HIBD組；腦組織水腫明顯，神經(jīng)元排列紊亂，胞體皺縮，胞質(zhì)深染，核濃縮，結(jié)構(gòu)不清，伴有膠質(zhì)細(xì)胞增生。 3.Bcl-2蛋白表達(dá)檢測(cè)結(jié)果 Bcl-2蛋白在假手術(shù)組中存在低水平表達(dá)，HIBD后表達(dá)明顯增高，EPO干預(yù)組較生理鹽水對(duì)照組及HIBD組更高。生理鹽水對(duì)照組與HIBD組相比，EPO大、中、小劑量三組兩兩相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其余各組間比較

5、均有顯著性差異。 4.Bax蛋白表達(dá)檢測(cè)結(jié)果 Bax蛋白在假手術(shù)組中表達(dá)微弱，HIBD后表達(dá)明顯增高，EPO干預(yù)組較生理鹽水對(duì)照組及HIBD組表達(dá)降低。生理鹽水對(duì)照組與HIBD組相比，EPO大、中、小劑量三組兩兩相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其余各組間比較均有顯著性差異。 5.Bcl-2與Bax比值的變化 Bcl-2/Bax在腦組織缺氧缺血性損傷后降低，EPO干預(yù)后又升高。生理鹽水對(duì)照組與HIBD組相比，EPO大、中、小劑量三組