阻斷促紅細(xì)胞生成素對視網(wǎng)膜新生血管形成的影響.pdf

1、目的：建立C57BL/6小鼠氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜新生血管病變模型(Oxygen Induced Retinopathy，OIR)，觀察眼內(nèi)促紅細(xì)胞生成素(Erythropoietin，EPO)含量的變化，并初步探討EPO特異性阻斷對視網(wǎng)膜新生血管(Retinal Neovascularization，RNV)形成的影響。 方法：1.建立小鼠OIR模型，觀察和計數(shù)各組小鼠視網(wǎng)膜新生血管。 2.新生C57BL/6小鼠共60只，隨機分

2、為實驗組(n=50)和對照組(n=10)。(1)實驗組小鼠于出生后第7日(P7)與母鼠共置于密閉的氧箱，氧分壓為75％±5％，共培養(yǎng)5天后(P12)回到正常氧環(huán)境，氧分壓為20％±1％，建立OIR模型。對照組小鼠不進(jìn)入氧箱，與母鼠一同飼養(yǎng)于正常氧環(huán)境。(2)所有小鼠出生后于P12-P16日隔日行右眼玻璃體內(nèi)注射。實驗組存活40只，隨機分為4組，每組10只，分別注射含有25ng(25ng組)，50ng(50ng組)，250ng(250ng

3、組)可溶性EPO受體的PBS液0.5 μl以及等容積不含EPO受體的PBS液(PBS組)，對照組10只小鼠注射不含EPO受體PBS液0.5 μl。(3)于P17日處死各組小鼠，摘取右眼眼球制作組織切片，HE染色后行病理組織學(xué)檢查，計數(shù)突破內(nèi)界膜RNV內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù)。采用放射免疫法測定PBS組和對照組小鼠左眼視網(wǎng)膜組織EPO含量。 結(jié)果：(1)視網(wǎng)膜組織切片顯示：氧誘導(dǎo)后的P17日小鼠突破內(nèi)界膜RNV內(nèi)皮細(xì)胞核計數(shù)為80.0±6.2

4、個，而常氧環(huán)境下的小鼠僅為1.0±0.9個，二者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)。 (2)EPO放射免疫法測定結(jié)果顯示：PBS組視網(wǎng)膜EPO含量為80.82±20.70 IU/L，對照組為14.42±6.80 IU/L，二者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)。 (3)視網(wǎng)膜組織EPO表達(dá)與RNV增生程度呈明顯正相關(guān)(rs=0.58，P<0.01)。 (4)各模型組小鼠RNV內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù)均明顯多于對照組(1.3±

5、0.5個)，而在OIR模型各組中，PBS組RNV內(nèi)皮細(xì)胞核計數(shù)(82.0±5.5個)多于各濃度EPO受體組(P<0.001)，25ng組的RNV內(nèi)皮細(xì)胞核計數(shù)(62.2±4.5個)和50ng組RNV內(nèi)皮細(xì)胞核計數(shù)(43.3±3.2個)均多于250ng組(22.2±2.1個)(P<0.001)，并且25ng組RNV內(nèi)皮細(xì)胞核計數(shù)多于50ng組(P<0.001)。 結(jié)論： 1.采用氧誘導(dǎo)小鼠視網(wǎng)膜病變能成功建立視網(wǎng)膜新生血管