促紅細胞生成素對脫離視網膜感光細胞的保護作用及機制.pdf

1、目的：觀察內源性及外源性EPO對脫離視網膜感光細胞的保護作用并探討其可能機制。 方法：采用視網膜下腔注射1.4％透明質酸鈉建立大鼠RD模型，分別于不同時間點檢測EPO和EPOR的mRNA和蛋白表達水平的變化并采用免疫組織化學方法進行定位。為觀察EPOsR對正常視網膜神經元存活的影響，2、20、200ngEPOsR分別注入正常大鼠玻璃體腔，注射前記錄FERG，注射后3d再次進行FERG檢查及視網膜神經元TUNEL凋亡原位檢測；注射

2、后7d進行光學顯微鏡和透射電鏡檢查。為了觀察內源性EPO對RD后感光細胞的保護作用，2、20、200ngEPOsR分別注入大鼠RD模型玻璃體腔。RD后3d進行TUNEL檢測及Western-blot方法和免疫熒光檢測Caspase-3活性；于RD后14d進行組織病理學檢查及ONL厚度測量。EPO400ng注入大鼠玻璃體腔，以評價EPO的安全性。為了進一步驗證EPO對脫離視網膜感光細胞的保護作用，100、200、400ngEPO分別注入大

3、鼠RD模型玻璃體腔，于RD后3d進行TUNEL檢測及EPOR、Caspase-3和Bcl-XL表達的檢測；于RD后第14d、28d、2個月進行組織病理學檢查及ONL厚度測量。為了觀察EPO對信號轉導途徑的影響，400ngEPO注入大鼠RD模型玻璃體腔，采用Western-blot分別檢測JAK2、p-JAK2、Akt、p-Akt、ERK-1/2、p-ERK-1/2、STAT5、p-STAT5、NF-κB、P-NF-κB的表達水平。

4、 結果：RD后EPO和EPOR的mRNA表達均上調，均于RD后48h達到高峰。EPO和EPOR的mRNA表達水平分別于RD后12h、6h顯著高于正常對照組(P＜0.05)：同樣EPO和EPOR的蛋白表達水平也呈現相同趨勢，均于RD后3h顯著高于正常對照組(P＜0.05)。玻璃體腔注射EPOsR前后各組a波、b波的潛伏期及振幅無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)；OPs的P4潛伏期和各子波總振幅也無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)；全層視網膜神經元T

5、UNEL凋亡原位檢測未見凋亡細胞;光學顯微鏡和透射電鏡檢查均未見明顯組織病理性改變。RD后玻璃體腔給予EPOsR可加劇感光細胞凋亡，且具有劑量依賴性。Caspase-3活性檢測結果趨勢與之相一致。14d時，正常對照組、RD組、RD+PBS組、RD+EPOsR2、20、200ng組ONL厚度分別為：(47.39±3.39)μm、(33.96±3.54)μm、(31.83±5.21)μm、(31.40±2.63)μm、(24.99±2.06

6、)μm、(19.30±3.71)μm；RD+EPOsR200ng組與其他各組間差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。玻璃體腔注射EPO沒有改變視網膜結構和功能。RD后玻璃體腔補充重組大鼠源性EPO100、200、400ng可見凋亡細胞減少，且具有劑量-效應關系。Caspase-3的活性呈現相應趨勢。RD后14d，正常對照組、RD組、RD+PBS組、RD+EPO100、200、400ng組ONL厚度分別為：(45.70±1.53)μm、(35

7、.00±1.66)μm、(34.79±1.15)μm、(34.60±1.02)μm、(36.82±1.23)μm和(40.20±2.41)μm。RD后2個月，各組ONL厚度分別為：(46.744±1.97)μm、(14.51±1.42)μm、(14.70±1.19)μm、(18.17±1.23)μm、(26.28±4.25)μm和(34.00±2.40)μm。RD后14d及2個月感光細胞的內外節(jié)的長度及排列規(guī)則程度均優(yōu)于單純RD對照組。

8、Western-blot分析結果顯示RD后玻璃體腔補充外源性EPO對EPOR表達無影響，但可以抑制Caspase-3活性并增強Bcl-XL表達。RD后玻璃體腔注射外源性EPO對總JAK2、總Akt、總ERK-1/2、總STAT5、總NF-κB水平均無改變，但顯著增加了JAK2、Akt、ERK-1/2的磷酸化水平。 結論：RD后大鼠視網膜由于缺氧EPO和EPOR表達均增強，48h達到高峰，大鼠神經視網膜大部分層次均能表達EPO和E