不同來源的EPCs對(duì)NSCs增殖分化的影響.pdf

1、本文分析了不同來源的EPCs對(duì)NSCs增殖分化的影響。本研究分為三個(gè)部分：
　　第一部分：不同胎齡SD胎鼠脊髓源性NSCs特性的比較。
　　目的：探究不同胎齡SD胎鼠脊髓源性NSCs增殖分化能力的差異。
　　方法：將選取的不同孕齡的SD孕鼠隨機(jī)分為3組：A組（孕12d）、B組（孕14d）、C組（孕16d）。采用酶消化法結(jié)合機(jī)械分離法提取脊髓源性NSCs，檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)各組NSCs神經(jīng)球的直徑和數(shù)量，通過CCK-8法繪制

2、各組NSCs的生長(zhǎng)曲線。Brd-U和Nestin免疫熒光染色鑒定各組NSCs的增殖特性和神經(jīng)干細(xì)胞屬性。10％FBS誘導(dǎo)分化后行β-tubulinⅢ、GFAP免疫熒光染色分別鑒定誘導(dǎo)分化后的神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞，比較各組NSCs誘導(dǎo)分化的神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和原漿型星形膠質(zhì)細(xì)胞的比例。
　　結(jié)果：各組NSCs Brdu、Nestin、β-tubulinⅢ、GFAP免疫熒光染色均為陽性。B組神經(jīng)元細(xì)胞的分化比例在三組中最高(22.7

3、4±0.79)%；后兩組NSCs神經(jīng)球直徑和數(shù)量以及神經(jīng)元的分化比例第一組(P<0.05)。第3代NSCs培養(yǎng)第5天B組細(xì)胞OD值(0.5107±0.0272)高于C組(P<0.05)。
　　結(jié)論：采用機(jī)械分離法結(jié)合酶消化法獲取的脊髓源性NSCs在體外培養(yǎng)環(huán)境中增殖活力強(qiáng)，性質(zhì)穩(wěn)定；E14天取材培養(yǎng)的NSCs在體外生物學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，細(xì)胞的增殖活力旺盛，誘導(dǎo)后分化為神經(jīng)元的分化比例高于E12d和E16d。
　　第二部分：SD胎鼠

4、腦源性NSCs和脊髓源性NSCs增殖分化能力的比較。
　　目的：比較SD胎鼠腦源性NSCs和脊髓源性NSCs在體外培養(yǎng)環(huán)境中增殖分化能力的差異。
　　方法：采用酶消化法結(jié)合機(jī)械分離法提取孕14天SD胎鼠腦源性NSCs和脊髓源性NSCs，通過Nestin和Brd-U鑒定NSCs的神經(jīng)干細(xì)胞屬性和增殖特性，檢測(cè)比較各組NSCs神經(jīng)球的直徑和數(shù)量，采用CCK-8法繪制細(xì)胞曲線，比較不同來源NSCs的生長(zhǎng)活力。10%FBS誘導(dǎo)后對(duì)分

5、化細(xì)胞行β-TubulinⅢ和GFAP免疫熒光染色分別鑒定神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞。比較兩組神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和原漿型星形膠質(zhì)細(xì)胞的分化比例。
　　結(jié)果：兩種來源的NSCs對(duì)Nestin和Brd-U免疫熒光染色均呈陽性反應(yīng)；兩組NSCs誘導(dǎo)后均可分化β-TubulinⅢ陽性的神經(jīng)元和GFAP陽性的星形膠質(zhì)細(xì)胞。腦源性NSCs誘導(dǎo)分化后神經(jīng)元比例（27.56±0.79）%較脊髓源性NSCs（25.58±0.72）%相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

6、（P<0.05），但是后者誘導(dǎo)分化后原漿型星形膠質(zhì)細(xì)胞的比例（53.09±2.88）%則明顯高于腦源性NSCs（50.60±2.88）%（P<0.05）。
　　結(jié)論：腦源性NSCs分化后神經(jīng)元的比例高于脊髓源性NSCs，而原漿型星形膠質(zhì)細(xì)胞的分化比例后者高于前者。
　　第三部分：骨髓源性EPCs和外周血源性EPCs對(duì)NSCs的生物學(xué)作用。
　　目的：探究骨髓和外周血來源的EPCs對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化能力的影響。

7、　　方法：采用密度梯度離心法結(jié)合差速貼壁分離法提取SD大鼠外周血源性EPCs和骨髓源性EPCs。通過酶消化法結(jié)合機(jī)械分離法獲得孕14d SD胎鼠脊髓源性NSCs。之后將EPCs接種于Transwell小室上層，NSCs位于下層，分為3組：A組，外周血源性EPCs+NSCs；B組，骨髓源性EPCs+NSCs；C組，DMEM條件培養(yǎng)基+NSCs。通過攝取Dil-acLDL、結(jié)合FITC-UEA-1實(shí)驗(yàn)及CD34和vWF免疫熒光鑒定EPCs。

8、Nestin/β-tubulin-Ⅲ/GFAP免疫熒光染色鑒定NSCs。檢測(cè)各組一周內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)球的直徑和數(shù)量，采用CCK-8法繪制各組NSCs的生長(zhǎng)曲線；10%FBS誘導(dǎo)分化后行β-tubulin-Ⅲ免疫熒光染色檢測(cè)各組神經(jīng)元分化比例，GFAP免疫熒光染色檢測(cè)星形膠質(zhì)細(xì)胞和原漿型星形膠質(zhì)細(xì)胞的分化比例。
　　結(jié)果：來自外周血和骨髓的兩種不同來源的EPCs均能夠吞噬Dil-acLDL，也能結(jié)合FITC-UEA-1。CD34和v