左旋多巴干預(yù)兔激素性股骨頭壞死的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討激素性股骨頭壞死的發(fā)病機(jī)制及左旋多巴的干預(yù)作用。
　　 方法：健康成年中國(guó)大耳白兔36只，體重為2.5土0.6公斤，雌雄不限。隨機(jī)分為三組。A組：左旋多巴干預(yù)組，12只，經(jīng)耳緣靜脈注射10ug/Kg的LPS，24小時(shí)后于臀肌注射20mg/Kg MPS琥珀酸鈉，共3次，每次間隔24小時(shí)。注射完成后當(dāng)日開始口服左旋多巴，劑量0.4g/Kg/天。B組：模型組，12只，同A組建立模型，未予藥物干預(yù)。C組：對(duì)照組，12只，于相同

2、時(shí)間點(diǎn)注射等量生理鹽水，用于實(shí)驗(yàn)對(duì)照。實(shí)驗(yàn)期間每組動(dòng)物均以標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，肌肉注射青霉素80萬(wàn)u/只，2次/周，預(yù)防感染。制模后第2周、6周、8周分別采取每組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物兔耳緣靜脈血2ml離心，收集上清，ELISA試劑盒測(cè)定血清中BALP、PINP含量水平；分別行雙側(cè)股骨近端(含股骨頭)骨密度測(cè)定。制模后第6周、8周采用空氣栓塞法各組分別處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物6只，處死前行雙髖X線片及MRI檢查，處死后取出雙側(cè)股骨頭標(biāo)本，觀察比較標(biāo)本大體形態(tài)變化后，用

3、10％福爾馬林液體浸泡固定后，經(jīng)脫鈣、包埋、切片后，HE染色，光鏡觀察骨小梁、骨細(xì)胞及脂肪細(xì)胞等結(jié)構(gòu)變化。所得數(shù)據(jù)用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包處理，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的方差分析方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，各組之間采用LSD兩兩比較檢驗(yàn)組間差異的顯著性，左旋多巴組、模型組在第2周、第6周、第8周動(dòng)態(tài)變化情況采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)方差分析。
　　 結(jié)果：建模后第2周，左旋多巴干預(yù)組、模型組、對(duì)照組影像學(xué)檢查顯示雙側(cè)股骨頭無(wú)顯

4、著變化。第6周時(shí)，模型組股骨頭表面顏色發(fā)白、暗淡，無(wú)光澤，軟骨面毛糙，但尚完整；雙髖關(guān)節(jié)X片提示模型組12只動(dòng)物有8只15個(gè)股骨頭內(nèi)骨質(zhì)不均勻，有點(diǎn)狀密度減低區(qū)，骨小梁排列紊亂、模糊，股骨頭形狀完整，無(wú)塌陷。左旋多巴干預(yù)組股骨頭表面顏色仍較紅潤(rùn)，軟骨面完整、光滑；X片示股骨頭形態(tài)完整，股骨頭內(nèi)骨小梁欠清晰，股骨頭內(nèi)骨密度略有升高，未見囊性變，關(guān)節(jié)間隙正常。第8周后，模型組股骨頭有程度不等的變形，軟骨面失去光滑表現(xiàn)，部分可見軟骨面塌陷剝脫

5、凹痕，標(biāo)本切鋸時(shí)骨質(zhì)硬度減低，阻力較小，易于剖切；雙髖關(guān)節(jié)X線片示股骨頭有不同程度的形狀不規(guī)則，變平變小，股骨頭內(nèi)密度不均，略有塌陷，骨小梁結(jié)構(gòu)紊亂，頭內(nèi)可見囊樣變，股骨近端骨質(zhì)較疏松，關(guān)節(jié)間隙略窄；MRI顯示股骨頭形狀不規(guī)則，關(guān)節(jié)面不平，有塌陷，關(guān)節(jié)間隙變窄，股骨頭上方鄰近關(guān)節(jié)處呈不均勻低信號(hào)分布，T1W1表現(xiàn)為細(xì)條狀，片狀低信號(hào)，T2WI表現(xiàn)為細(xì)條狀、片狀高信號(hào)/低信號(hào)，GESTIR序列股骨頭內(nèi)及干骺端表現(xiàn)為高信號(hào)骨髓水腫改變；HE

6、染色組織學(xué)觀察顯示骨小梁排列較散亂，萎縮變細(xì)、稀疏、部分?jǐn)嗔?，空骨陷窩顯著增多，骨小梁之間脂肪堆積，脂肪細(xì)胞體積增大，部分脂肪細(xì)胞互相融合，骨小梁內(nèi)正常骨細(xì)胞數(shù)量減少，較多的細(xì)胞核固縮、核偏位于一側(cè)，骨小梁周圍成骨細(xì)胞少見。而左旋多巴干預(yù)組第8周時(shí)股骨頭顏色稍暗淡，表面完整，稍有毛糙，關(guān)節(jié)面無(wú)塌陷，剝脫，切鋸標(biāo)本時(shí)，阻力明顯較模型組大；雙髖關(guān)節(jié)x線片表現(xiàn)為股骨頭外形圓滑，無(wú)塌陷，股骨頭內(nèi)骨密度升高，未見囊性變及硬化骨，關(guān)節(jié)間隙正常；MR

7、I檢查股骨頭不變形，關(guān)節(jié)間隙正常，股骨頭上方鄰近關(guān)節(jié)處T1 WI可見細(xì)條狀低信號(hào)；T2WI表現(xiàn)為條狀、小片狀高信號(hào)/低信號(hào)，無(wú)軟骨下骨折發(fā)生；HE染色示骨小梁排列結(jié)構(gòu)尚規(guī)則，骨小梁較粗，連成網(wǎng)狀，小梁內(nèi)骨細(xì)胞數(shù)目較多，脂肪細(xì)胞基本正常，未見明顯融合現(xiàn)象，髓腔內(nèi)生血細(xì)胞較多，骨細(xì)胞核大，較清晰，可見部分空骨陷窩。
　　 第2周左旋多巴干預(yù)組、模型組、對(duì)照組PINP差別不明顯。第6周左旋多巴干預(yù)組(1.73±0.22μg/L)與對(duì)照

8、組(1.57±0.13μg/L)相比升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，左旋多巴干預(yù)組與模型組(1.60±0.10μg/L，)相比升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，模型組與對(duì)照組相比有所升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。第8周左旋多巴干預(yù)組(2.08±0.31μg/L)與對(duì)照組(1.61±0.28μg/L)、模型組(1.67±0.28μg/L)相比升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，模型組與對(duì)照組相比有所升高，但差

9、異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。左旋多巴組第8周、第6周PINP較第2周相比升高明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 BALP水平第2周左旋多巴組、模型組、對(duì)照組差別不明顯，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。第6周左旋多巴干預(yù)組(1.49±0.09 U/L)與對(duì)照組(1.13±0.10 U/L)、模型組(1.21±0.08 U/L)相比升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，模型組與對(duì)照組相比有所升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

10、P>0.05)。治療后第8周左旋多巴干預(yù)組(1.70±0.07U/L)與對(duì)照組(1.18±0.25 U/L)相比升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，左旋多巴干預(yù)組與模型組(1.31±0.26 U/L)相比升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，模型組與對(duì)照組相比有所升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。左旋多巴組第8周、第6周BALP較第2周相比升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 第2周左旋多巴組、模型組、對(duì)

11、照組股骨近端BMD值無(wú)顯著差別(P>0.05)。第6周模型組(0.272±0.017 g/cm2)與左旋多巴組(0.298±0.015 g/cm2)BMD值均有下降，與對(duì)照組(0.328±0.016 g/cm2)相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；但模型組BMD值低于左旋多巴組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。第8周左旋多巴組BMD值(0.312±0.014g/cm2)上升，但仍低于對(duì)照組(0.332±0.007 g/cm2)，模型

12、組BMD值(0.263±0.006 g/cm2)進(jìn)行性下降，低于對(duì)照組與左旋多巴組，差異性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.短期內(nèi)單次低劑量?jī)?nèi)毒素聯(lián)合3次大劑量糖皮質(zhì)激素，可成功誘導(dǎo)激素性股骨頭壞死，糖皮質(zhì)激素與股骨頭壞死的發(fā)生關(guān)系密切。
　　 2.激素性股骨頭壞死發(fā)病過程中，存在骨代謝的變化，早期檢測(cè)反映成骨細(xì)胞活性的骨轉(zhuǎn)換生化標(biāo)志物BALP及PINP水平變化能間接反映了機(jī)體骨形成及修復(fù)的