血管化聚-DL-乳酸-納米羥基磷灰石復(fù)合多孔支架修復(fù)兔股骨頭壞死的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分多次小劑量內(nèi)毒素聯(lián)合糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)兔股骨頭壞死的實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的：激素性股骨頭壞死是臨床最常見股骨頭壞死類型，其病理機(jī)制尚未完全研究清楚，本實(shí)驗(yàn)旨在利用一種新型的股骨頭壞死造模方法，是動物模型病理改變能接近臨床常見病理改變類型，為骨壞死是實(shí)驗(yàn)研究提供基礎(chǔ)，基本方案為多次小劑量內(nèi)毒素聯(lián)合糖皮質(zhì)激素注射，同時(shí)探討該方法的效率及可行性
　　 材料與方法：36只兔子被隨機(jī)分為四組，A組單純注射內(nèi)毒素（LPS，100μ

2、g/kg），B組為聯(lián)合注射內(nèi)毒素與甲強(qiáng)龍（MPS，20μg/kg），C組為單純注射甲強(qiáng)龍，D組為空白對照組。最后一次注射后6周各組動物行影像學(xué)檢測、血液檢測以及組織學(xué)檢測，檢測各組骨壞死發(fā)生率，比較各組差異。
　　 結(jié)果：組織學(xué)顯示各組總骨壞死發(fā)生率為83.3％（25/30），骨壞死主要方生部位為干骺端，壞死區(qū)與正常骨區(qū)別明顯，發(fā)灰發(fā)白，表面不光滑，鏡下顯示大量細(xì)胞碎片，骨髓細(xì)胞減少消失，骨小梁稀疏出現(xiàn)空泡。血液學(xué)檢查聯(lián)合應(yīng)用內(nèi)

3、毒素和甲強(qiáng)龍后血小板數(shù)量明顯減少，出現(xiàn)高凝狀態(tài)與低纖溶狀態(tài)。影像學(xué)核磁共振結(jié)果顯示各組在T1加權(quán)像股骨頭及股骨近端表現(xiàn)為點(diǎn)狀或片狀低信號，T2加權(quán)像表現(xiàn)為不規(guī)則片狀高信號；Micro-CT顯示壞死區(qū)骨小梁稀疏，出現(xiàn)致密或空泡，軟骨面變薄，形狀不規(guī)則。
　　 結(jié)論：聯(lián)合應(yīng)用內(nèi)毒素和激素能有效誘導(dǎo)兔股骨頭壞死，其病理與人早期激素性股骨頭壞死類似，該方法效率高，造模時(shí)間較短。
　　 第二部分體外構(gòu)建血管化組織工程骨及其血管誘導(dǎo)

4、活性檢測
　　 目的：嘗試體外分離培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，并向內(nèi)皮樣細(xì)胞誘導(dǎo)，將誘導(dǎo)后的內(nèi)皮樣細(xì)胞作為種子細(xì)胞體外與PDLLA/nHA支架復(fù)合培養(yǎng)，并觀察細(xì)胞支架復(fù)合物在體內(nèi)的成血管活性。
　　 材料與方法：分離培養(yǎng)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，原代開始向內(nèi)皮樣細(xì)胞誘導(dǎo)，誘導(dǎo)培養(yǎng)至第三代與PDLLA/nHA支架復(fù)合培養(yǎng)，觀察細(xì)胞與支架生物相容性、細(xì)胞貼附率以及掃描電鏡下觀察支架超微結(jié)構(gòu)及體外支架血管化情況。兔肌袋內(nèi)植入細(xì)胞支架復(fù)合物

5、，觀察體外血管化支架在體內(nèi)血管誘導(dǎo)活性。
　　 結(jié)果：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)至第三代，流式細(xì)胞術(shù)檢測顯示細(xì)胞表行為CD31+，CD34+，VEGFR-2+/CD45-，CD105-，免疫熒光CD31陽性，證實(shí)誘導(dǎo)后細(xì)胞為血管內(nèi)皮樣細(xì)胞。細(xì)胞支架復(fù)合培養(yǎng)后掃描電鏡觀察支架材料孔隙適中，聯(lián)通性好，細(xì)胞與支架生物相容性良好。細(xì)胞支架復(fù)合物植入兔肌袋內(nèi)2周后能在局部形成明顯毛細(xì)血管樣結(jié)構(gòu)，血管誘導(dǎo)性良好。
　　 結(jié)論：骨髓間充

6、質(zhì)干細(xì)胞能向血管內(nèi)皮樣細(xì)胞轉(zhuǎn)化，作為種子細(xì)胞與PDLLA/nHA支架生物相容性良好，細(xì)胞支架復(fù)合物有良好的體內(nèi)血管誘導(dǎo)能力。
　　 第三部分血管化復(fù)合rhVEGF的聚-DL-乳酸/納米羥基磷灰石多孔復(fù)合支架（rhVEGF releasing PDLLA/nHA）修復(fù)兔激素性股骨頭壞死的實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的：嘗試?yán)皿w外構(gòu)建的血管化聚-DL-乳酸/納米羥基磷灰石復(fù)合多孔支架治療兔早期股骨頭壞死。
　　 材料與方法：

7、采用多次小劑量內(nèi)毒素聯(lián)合激素誘導(dǎo)兔股骨頭壞死模型，所有動物均行股骨頭鉆孔減壓術(shù)，術(shù)后將動物隨機(jī)分為3組：細(xì)胞支架復(fù)合物植入組、單純支架植入組以及空白對照組。從血液生化、組織形態(tài)、組織病理、影像學(xué)等方面檢測各組動物樣本，并比較各組不同。
　　 結(jié)果：血液生化方面，細(xì)胞支架復(fù)合植入組血清降鈣素明顯高于單純支架組以及對照組；MRI及Micro-CT顯示細(xì)胞支架復(fù)合植入組可見明顯組織修復(fù)及新骨形成，VVF及BVF均明顯高于其余兩組；組織