VEGF轉(zhuǎn)染MSCs結(jié)合PLA-HA多孔支架治療兔早期股骨頭壞死的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分 激素聯(lián)合脂多糖誘導(dǎo)早期兔股骨頭壞死的實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的：運(yùn)用組織學(xué)技術(shù)、CT掃描和顯微CT成像觀察激素聯(lián)合脂多糖誘導(dǎo)早期兔股骨頭壞死的實(shí)驗(yàn)效果。
　　 方法：健康雄性新西蘭大白兔30只，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組25只和對照組5只，實(shí)驗(yàn)組經(jīng)耳緣靜脈注射10μg/Kg的脂多糖二次，再肌肉注射20mg/Kg甲潑尼龍三次，對照組注射同等劑量的生理鹽水，5周后CT掃描髖關(guān)節(jié)，隨機(jī)處死實(shí)驗(yàn)組和對照組兔4只，顯微CT成像掃描股骨近端

2、，并作組織切片觀察。
　　 結(jié)果：CT掃描顯示實(shí)驗(yàn)組兔股骨頭不同程度的骨密度不均勻，顯微CT成像顯示骨質(zhì)疏松，軟骨下骨囊性化，周圍見硬化骨，組織學(xué)切片見骨細(xì)胞陷窩空疏，脂肪細(xì)胞增多，部分血管栓塞。
　　 結(jié)論：激素聯(lián)合脂多糖能夠安全便捷地誘導(dǎo)兔早期股骨頭壞死模型。
　　 第二部分VEGF基因轉(zhuǎn)染MSCs結(jié)合PLA/HA復(fù)合多孔支架的異位成骨研究
　　 目的：觀察pcDNA3.1-VEGF165重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染

3、大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）結(jié)合聚乳酸/納米羥基磷灰石復(fù)合多孔支架的異位成骨效果。
　　 方法：實(shí)驗(yàn)分為3組：⑴VEGF轉(zhuǎn)染MSCs復(fù)合材料組，⑵空白載體轉(zhuǎn)染 MSCs復(fù)合材料組，⑶單純支架組。分離大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，誘導(dǎo)成骨條件培養(yǎng)，基因轉(zhuǎn)染后RT-PCR和Western blot方法檢測VEGF的表達(dá)，細(xì)胞與材料復(fù)合后掃描電鏡觀察。將復(fù)合細(xì)胞的支架材料植入大鼠肌袋后第2，4，8周進(jìn)行X線和組織學(xué)檢測。
　　 結(jié)

4、果：成功分離出大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞，并誘導(dǎo)成骨方向培養(yǎng)，RT-PCR和Western blot顯示轉(zhuǎn)染后MSCs的VEGF表達(dá)水平明顯高于其他2組，聚乳酸/納米羥基磷灰石復(fù)合多孔支架呈三維多孔隙結(jié)構(gòu)，細(xì)胞能有效生長，植入大鼠體內(nèi)后，轉(zhuǎn)染組4周可見異位成骨，8周更加明顯，另2組未見明顯成骨。
　　 結(jié)論：VEGF基因轉(zhuǎn)染大鼠MSCs復(fù)合PLA/HA多孔支架能在大鼠體內(nèi)誘導(dǎo)成骨。
　　 第三部分VEGF基因轉(zhuǎn)染MSCs結(jié)合PL

5、A/HA復(fù)合多孔支架治療兔早期股骨頭壞死
　　 目的：探討利用pcDNA3.1-VEGF165重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染兔MSCs與PLA/HA多孔支架復(fù)合后植入股骨頭壞死模型兔的股骨頭內(nèi)，觀察其成血管和成骨能力。
　　 方法：分離、培養(yǎng)兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞，pcDNA3.1-VEGF165重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染兔MSCs后RT-PCR檢測VEGF表達(dá)情況，將轉(zhuǎn)染后的兔MSCs與PLA/HA多孔支架復(fù)合。實(shí)驗(yàn)分為四組：⑴pcDNA3.1-VEGF1

6、65重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染MSCs復(fù)合支架組，⑵空白載體轉(zhuǎn)染 MSCs復(fù)合支架組，⑶單純支架植入組，⑷未處理組。經(jīng)兔股骨大轉(zhuǎn)子后下方向股骨頭鉆直徑3mm工作隧道，植入支架材料。術(shù)后分別于8、12周對股骨頭行顯微CT及組織病理學(xué)切片檢查，第12周行X線攝影。
　　 結(jié)果：成功分離培養(yǎng)出兔MSCs，pcDNA3.1-VEGF165重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后，VEGF表達(dá)水平明顯高于其他組。pcDNA3.1-VEGF165重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染MSCs支架植入股骨頭

7、后8周可見壞死骨小梁周圍部分新骨形成，支架周圍成纖維細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤，小血管形成，12周見新生骨小梁生成，支架吸收，而其他組未見明顯新生骨。顯微CT顯示重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組股骨頭形態(tài)正常，骨小梁分布均勻，其他組部分股骨頭變形，軟骨下骨變薄，骨小梁稀疏、斷裂。X線顯示重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組股骨頭形態(tài)正常、密度均勻，未治療組股骨頭明顯變形，骨密度不均勻。
　　 結(jié)論：pcDNA3.1-VEGF165重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染兔MSCs復(fù)合PLA/HA多孔支架