新的GATA1活性調(diào)控分子的作用研究.pdf

1、GATA1是調(diào)控造血干細(xì)胞向紅系分化發(fā)育的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子,并在巨噬細(xì)胞、嗜酸細(xì)胞、肥大細(xì)胞的分化和形成過程中發(fā)揮重要作用。多種蛋白質(zhì)可與GATA1相互作用形成不同的復(fù)合體,通過調(diào)控其活性,進(jìn)而選擇性調(diào)控靶基因表達(dá)。對GATA1新的活性調(diào)控分子的研究可望揭示GATA1調(diào)控HSC定向分化中的新機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)室前期利用免疫共沉淀技術(shù)、級聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)對GATA1相互作用蛋白質(zhì)進(jìn)行了篩選和鑒定,獲得兩個(gè)相互作用蛋白質(zhì)THAP11和EDAG。
　　

2、THAP11屬于THAP家族的新成員,該家族蛋白廣泛參與細(xì)胞生長、增殖、染色體重塑及細(xì)胞分化等。目前對THAP11的研究報(bào)道較少,對其功能的研究尚不深入。研究表明THAP11是一種細(xì)胞生長抑制因子,THAP11可通過結(jié)合c-Myc啟動子,抑制其活性,并進(jìn)而抑制細(xì)胞生長增殖。對THAP11小鼠同源蛋白Ronin的研究表明:該基因敲除可導(dǎo)致胚胎致死,過表達(dá)Ronin可促進(jìn)ES細(xì)胞增殖,卻并不發(fā)生分化。ChIP檢測發(fā)現(xiàn)Ronin可與HCF-1

3、相互作用,結(jié)合在多種基因的啟動子區(qū),這些基因參與了細(xì)胞生長、代謝、分化及mRNA剪接等。以上研究表明THAP11是參與細(xì)胞生長、ES細(xì)胞增殖分化的重要因子,但對其在造血發(fā)育分化中的作用尚無報(bào)道。
　　紅系分化相關(guān)基因EDAG(Erythroid Differentiation Associated Gene)是實(shí)驗(yàn)室早期發(fā)現(xiàn)胎肝特異表達(dá)的新基因,研究表明EDAG可增強(qiáng)造血細(xì)胞的增殖能力,抑制細(xì)胞分化,并通過激活NF-kB促進(jìn)細(xì)胞存

4、活,增強(qiáng)細(xì)胞抗凋亡能力。利用EDAG特異表達(dá)造血組織的轉(zhuǎn)基因小鼠模型,發(fā)現(xiàn)EDAG的過表達(dá)可促進(jìn)髓系造血,而抑制淋巴系發(fā)生發(fā)育,小鼠出現(xiàn)典型的髓系增生綜合癥。過表達(dá)EDAG可導(dǎo)致32D細(xì)胞出現(xiàn)紅系表型,并上調(diào)GATA1及其靶基因的表達(dá)。這些研究結(jié)果提示EDAG參與了HSC多個(gè)譜系的定向分化。此外,還發(fā)現(xiàn)EDAG是GATA1的靶基因,在造血細(xì)胞分化過程中受到GATA1的直接調(diào)控。但目前對EDAG與GATA1的相互作用并無報(bào)道。
　　

5、本研究明確了THAP11與GATA1存在相互作用,并確定了其相互作用結(jié)構(gòu)域,發(fā)現(xiàn)THAP11可以增強(qiáng)GATA1轉(zhuǎn)錄活性及 DNA結(jié)合能力,選擇性調(diào)控GATA1靶基因NF-E2的表達(dá)。發(fā)現(xiàn) EDAG可通過募集p300的方式增強(qiáng)GATA1活性,乙?；揎椏赡軈⑴cEDAG對GATA1的調(diào)控。GATA1/THAP11/EDAG三者形成復(fù)合體,并且THAP11可以拮抗EDAG對GATA1 DNA結(jié)合能力的增強(qiáng)作用。本論文通過對兩個(gè)新的GATA1調(diào)