PLGA-CS-PLGA-SA復(fù)合凝膠支架在構(gòu)建組織工程膀胱中的體外研究.pdf

1、目的：
　　制備PLGA-CS/PLGA-SA復(fù)合凝膠（PLGA-chitosan/PLGA-sodium alginate nanoparticle blends）可降解支架材料,在該復(fù)合凝膠上接種脂肪干細(xì)胞（Adipose—derived stem cells,ADSCs），構(gòu)建組織工程膀胱，并分析其優(yōu)缺點(diǎn)。
　　方法：
　　1.用雙乳法，制備聚乳酸-羥基乙酸共聚物（PLGA）、海藻酸鈉（SA）和殼聚糖（CS）復(fù)合

2、凝膠PLGA-CS/PLGA-SA，分別檢測(cè)PLGA-CS和PLGA-SA納米粒直徑及電位，并通過(guò)發(fā)射掃描電鏡觀察復(fù)合凝膠的3D微孔結(jié)構(gòu)。
　　2.用低溫震蕩法制備膀胱黏膜上皮。取豬膀胱，剝離出粘膜，用化學(xué)洗滌劑處理分離除去帶抗原的細(xì)胞成分，并用HE染色及Masson三色染色方法檢測(cè)細(xì)胞是否殘留。
　　3.取SD大鼠（雄鼠）雙側(cè)腹股溝處脂肪，0.1％Ⅰ型膠原酶37℃消化45min，提取ADSCs，培養(yǎng)至第三代備用。MTT法檢

3、測(cè)殼聚糖、海藻酸鈉、明膠、透明質(zhì)酸鈉及紫縈1號(hào)(Z1)等材料成分對(duì)脂肪干細(xì)胞的增殖生長(zhǎng)影響。以膀胱粘膜脫細(xì)胞基質(zhì)為對(duì)照組，添加明膠、紫縈1號(hào)的PLGA-CS/PLGA-SA復(fù)合凝膠聚合物為實(shí)驗(yàn)組，分別接種3代脂肪干細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，于第4天、第7天分別取出做HE染色，觀察細(xì)胞在各種材料的增殖生長(zhǎng)情況。
　　結(jié)果：
　　1.利用雙乳法制備PLGA-CS聚合物，通過(guò)電位及粒度分析儀檢測(cè)所得納米粒的顆粒直徑為（202.2±13.7

4、）nm，電勢(shì)為（14.41±2.37）mV；PLGA-SA聚合物納米粒的顆粒直徑為（143.4±5.2）nm，電勢(shì)為（-24.72±0.67）mV，與文獻(xiàn)報(bào)道相近。
　　2.膀胱粘膜脫細(xì)胞基質(zhì)經(jīng) HE染色及 Masson三色染色顯示無(wú)細(xì)胞殘留，呈纖維交聯(lián)結(jié)構(gòu)。
　　3.SD大鼠原代脂肪干細(xì)胞接種24h后，多數(shù)細(xì)胞呈短梭形，少數(shù)細(xì)胞呈多角形，細(xì)胞傳代后，形態(tài)不改變。取第3代ADSCs，進(jìn)行MTT法檢測(cè)。MTT檢測(cè)結(jié)果顯示，殼聚

5、糖、海藻酸鈉、明膠及紫縈1號(hào)(Z1)材料組細(xì)胞生長(zhǎng)增殖曲線明顯優(yōu)于單純的細(xì)胞增殖曲線（p＜0.05），透明質(zhì)酸鈉材料各濃度組細(xì)胞對(duì)細(xì)胞增殖影響程度不一，高濃度及低濃度均抑制細(xì)胞增殖。PLGA-CS/PLGA-SA復(fù)合凝膠及BSAM接種脂肪干細(xì)胞HE染色結(jié)果顯示，添加明膠、紫縈1號(hào)的PLGA-CS/PLGA-SA復(fù)合凝膠材料的三維結(jié)構(gòu)較BSAM更適宜細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖。
　　結(jié)論：
　　經(jīng)殼聚糖和海藻酸鈉改性的PLGA復(fù)合凝膠可以