Neuromedin U對(duì)小鼠DRG神經(jīng)元T型鈣離子通道的作用及機(jī)制的研究.pdf

1、目的：研究神經(jīng)介素U(neuromedin U，NMU)對(duì)小鼠背根神經(jīng)節(jié)(dorsal rootganglion，DRG)神經(jīng)元T型鈣離子通道的作用及機(jī)制。
　　 方法：培養(yǎng)小鼠背根神經(jīng)節(jié)(DRG)神經(jīng)元細(xì)胞，采用分子生物學(xué)的方法鑒定DRG神經(jīng)元上NMU受體類(lèi)型的表達(dá)。利用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)研究神經(jīng)介素U(NMU)對(duì)小直徑的DRG神經(jīng)元T型鈣電流的作用，并用藥理學(xué)方法研究其信號(hào)通路作用機(jī)制。
　　 結(jié)果：本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)：⑴

2、不論在mRNA水平，還是蛋白水平，小鼠背根神經(jīng)節(jié)上只能見(jiàn)到NMUⅠ型受體表達(dá)而未見(jiàn)NMUⅡ型受體表達(dá)；⑵電生理研究表明，NMU對(duì)背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞上的T型鈣通道的抑制作用具有劑量依賴關(guān)系。1μM NMU對(duì)T型鈣通道的抑制率約為27.4％；⑶藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，NMU對(duì)T型鈣通道的抑制作用能夠被GDP-β-S(特異性G蛋白活性抑制劑)或PTX(百日咳毒素)所阻斷，表明NMU是通過(guò)Gi/oα亞基發(fā)揮作用。運(yùn)用設(shè)置去極化前置脈沖以及電極內(nèi)液添加G蛋白

3、βγ亞基阻斷劑QEHA的方法發(fā)現(xiàn)，Gβγ亞基并不參與NMU對(duì)T型鈣通道的調(diào)控。另外，用蛋白激酶A(PKA)的選擇性阻斷劑H89和PKI5-24預(yù)先孵育背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞后，NMU對(duì)T型鈣通道的抑制作用被翻轉(zhuǎn)，而孵育磷脂酶C選擇性阻斷劑U73122和蛋白激酶C(PKC)的選擇性阻斷劑GF109203X和Chelerythrine chloride則無(wú)此效果。⑷細(xì)胞興奮性研究發(fā)現(xiàn)，NMU能夠明顯降低小直徑背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的放電頻率，抑制率為51.