膽囊收縮素CCK-8對小鼠背根神經(jīng)元A-型鉀通道電流作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究膽囊收縮素CCK-8（cholecystokinin-8；CCK-8）對小鼠背根神經(jīng)節(jié)（dorsal root ganglion，DRG）神經(jīng)元A-型鉀通道電流及興奮性作用和機(jī)制。
　　方法：急性分離小鼠背根神經(jīng)節(jié)（DRG）神經(jīng)元，利用分子生物學(xué)方法鑒定其膜上CCK2受體的表達(dá)。利用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)，研究CCK-8對小直徑DRG神經(jīng)元A-型鉀通道電流及興奮性的作用，并應(yīng)用藥理學(xué)方法研究其信號通路作用機(jī)制，最后在行為學(xué)的角

2、度驗(yàn)證CCK-8的致痛作用。
　　結(jié)果：本研究發(fā)現(xiàn)：1）在蛋白水平上，利用western blot和免疫熒光技術(shù)，小鼠背根神經(jīng)節(jié)上有CCK2受體表達(dá)；2）電生理結(jié)果顯示，CCK-8對DRG神經(jīng)元上的A-型鉀通道電流的抑制作用具有劑量依賴關(guān)系。100 nM CCK-8對A-型鉀通道電流的抑制率約為25.9％；3)CCK-8對A-型鉀通道電流的抑制作用能夠被LY225910（CCK2R特異性阻斷劑）、GDP-β-S（特異性G蛋白活性抑

3、制劑）、PTX（百日咳毒素）所阻斷。磷脂酰肌醇激酶（PI3K）的選擇性阻斷劑LY294002預(yù)先孵育背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞后，可以阻斷CCK-8對A-型鉀通道的抑制作用，而孵育蛋白激酶A（PKA）的選擇性阻斷劑PKI6-22、磷脂酶C（PLC）選擇性阻斷劑U73122和蛋白激酶 C（PKC）的選擇性阻斷劑 GF109203X、Chelerythrine chloride、RO31-8220，則無此效果。4）CCK-8顯著增加小直徑背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞