鑭對大鼠海馬神經(jīng)元瞬時外向和延遲整流鉀通道的調(diào)控作用.pdf

1、目的: 運用全細胞膜片鉗技術記錄細胞內(nèi)、外施加La3+后大鼠海馬神經(jīng)元IA、Ik電流的變化，分析La3+如何對海馬神經(jīng)元IA、Ik通道蛋白進行調(diào)節(jié)，為研究La3+的神經(jīng)毒性作用機理提供實驗基礎；比較細胞內(nèi)、外La3+對通道影響的差異，利用La3+作為一種離子探針，提示給我們一些關于IA、IK通道結構與功能之間關系的信息。 方法: 采用酶解法結合機械分離法得到急性分離的大鼠海馬神經(jīng)元，運用全細胞膜片鉗技術，記錄海馬

2、神經(jīng)元IA、Ik通道激活、失活及IA通道失活后恢復電流在細胞內(nèi)、外施加La3+后的變化。 結果: 1．細胞外100μmol/L La3+降低IA電流峰值的同時使IA穩(wěn)態(tài)激活曲線由2．08±2．58mV向去極化方向位移至22．97±7．28mV（n=24，P<0．001），k值減小，而對Ik的穩(wěn)態(tài)激活曲線無影響：細胞內(nèi)100μmol/L La3+使Ik穩(wěn)態(tài)激活曲線由23．19±5．21mV平行向超極化方向位移至13．39±

3、1．51mV（n=17，P<0．001），而對lA的穩(wěn)態(tài)激活曲線沒有影響； 2．細胞外100μmoVL La3+使IA的穩(wěn)態(tài)失活曲線由-48．86±7．95 mV向去極化方向位移至9．66±5．44 mV（n=17，P<0．01），k值增加；細胞內(nèi)100μmol/L La3+使IA的穩(wěn)態(tài)失活曲線平行向去極化方向位移至-23．59±17．97 mV（n=13，P<0．01），并且細胞內(nèi)La3+的存在減弱了細胞外La3+引起的IA穩(wěn)

4、態(tài)失活曲線右移程度； 3．細胞外100μmol/L La3+抑制IA的激活動力學，在刺激脈沖+30mV時，IA的激活時間常數(shù)τ值由1．29±0．05ms延長為6．65±0．75ms，+80mV時，τ值由1．04±0．09ms延長為2．43±0．13ms： 4．細胞外100μmol/L La3+延長IA的失活時間，在+30mV時，IA的衰減時間常數(shù)t值由48．02±13．26 ms增加為109．12±17．83ms，+80

5、mV時，τ值由49．55±11．95ms增加為97．81±24．97ms； 5．細胞外100μmol/L La3+使IA失活恢復時間由14．48±1．43ms延長到22．62±1．21MS： 6．細胞外20mmol/L Ca2+引起IA穩(wěn)態(tài)激活曲線右移并使k減小；在不同的分組中，先加20mmol/L Ca2+后加100μmol/L La3+，先加100μmol/L La3+后加20mmol/LCa2+，同時加20mmol

6、/L Ca2+與100μmol/L La3+，這些組中IA穩(wěn)態(tài)激活曲線均右移并且k減小，但這種變化在不同組之間沒有差異。 結論: 1．細胞外La3+延長IA通道的激活時間及失活時間，延長失活恢復時間，且細胞外La3+對IA通道激活時間的影響具有電壓依賴性，細胞外La3+可穩(wěn)定IA通道蛋白的激活、失活、失活恢復三個狀態(tài)； 2．細胞外La3+使IA穩(wěn)態(tài)激活曲線右移而對Ik穩(wěn)態(tài)激活曲線沒有影響，細胞內(nèi)La3+使Ik穩(wěn)態(tài)