運脾法調(diào)節(jié)CCK抑制VMH神經(jīng)元興奮性的離子通道機制.pdf

1、本實驗以幼齡大鼠下丘腦VMH 神經(jīng)元為研究對象，采用紅外可視腦片膜片鉗技術(shù)，在電流鉗下，記錄VMH 不同類型神經(jīng)元的膜電特性及CCK-8S 對不同類型神經(jīng)元自發(fā)放電頻率的影響；在電壓鉗下,檢測外加CCK-8S 前后VMH 神經(jīng)元的電流變化及對自發(fā)放電的影響。本實驗重點在于研究運脾復(fù)方通過對下丘腦和外周CCK-8S 水平的影響進(jìn)而調(diào)節(jié)下丘腦神經(jīng)元放電頻率的中間環(huán)節(jié)——即：CCK-8S 對食欲中樞VMH 神經(jīng)元興奮性調(diào)節(jié)的離子通道機制，以進(jìn)

2、一步明確運脾法調(diào)節(jié)“腸－腦軸”促進(jìn)攝食的中樞機制。 主要研究結(jié)果： 1.大鼠下丘腦VMH 神經(jīng)元的電生理特征和三種細(xì)胞類型 1) I 型神經(jīng)元：I 型神經(jīng)元在靜息電位沒有自發(fā)放電，并有相對較小的膜時間常數(shù)和輸入電阻，分別為（8±1）msec（n=4）和(192±39) MΩ（n=4）；在檢測中3/31 個細(xì)胞屬于此類。 2) Ⅱ型神經(jīng)元：Ⅱ型神經(jīng)元靜息電位具有自發(fā)放電，膜時間常數(shù)(14±1) msec（n

3、=11）和輸入電阻(327±2) MΩ（n=11）較I 型神經(jīng)元的顯著增大( P<0.05)；在檢測中11/31 個細(xì)胞屬于此類。 3) Ⅲ型神經(jīng)元：Ⅲ型神經(jīng)元靜息電位也有自發(fā)放電，膜時間常數(shù)（25±2）msec（n=17）和輸入電阻(522±28) MΩ（n=17）較I 型和Ⅱ型神經(jīng)元的都顯著增大( P<0.05)。在檢測中17/31個細(xì)胞屬于此類。 2. CCK-8S 對VMH 三種類型神經(jīng)元放電頻率的影響

4、Ⅰ型神經(jīng)元靜息電位沒有自發(fā)放電，0.4μmol/L CCK-8S 對其沒有作用；但0.4μmol/L CCK-8S 可以使Ⅱ型（n＝4）和Ⅲ型（n＝4）神經(jīng)元的自發(fā)放電頻率增加，它們的自發(fā)放電頻率都從(4±1) Hz增加到(8±1) Hz（ P<0.05），而動作電位的幅值沒有明顯變化。 3.CCK-8S 調(diào)節(jié)VMHⅡ型和Ⅲ型神經(jīng)元自發(fā)放電頻率的離子通道機制 1) 電流鉗模式下，超極化方波刺激誘發(fā)Ⅱ型和Ⅲ型神經(jīng)元在刺激起

5、始沒有出現(xiàn)sag；電壓鉗模式下，在Ⅱ型和Ⅲ型神經(jīng)元都沒有記錄到一個超極化激活的緩慢內(nèi)向流。VMHⅡ型和Ⅲ型神經(jīng)元可能不存在Ih 電流，神經(jīng)元的內(nèi)在起搏性可能也不是由Ih電流調(diào)控的，可能存在其它電流。 2) VMHⅢ型神經(jīng)元存在IA電流，其激活閾值在－60 mv到－50 mv 之間(n=6)。IA電流的失活具有電壓依賴性，半數(shù)最大失活閾值在(－65±1) mv。1 mM 4-AP可以完全阻斷該電流。Ⅱ型神經(jīng)元可能不存在IA電流。

6、 3) CCK-8S可以顯著的減少VMHⅢ型神經(jīng)元動作電位后超極化的時程和增加其自發(fā)放電頻率，但對后超極化幅值的影響沒有顯著性差異；同時CCK-8S可以明顯抑制IA電流。對加藥前后神經(jīng)元放電頻率增加值和IA電流減少值的相關(guān)性分析結(jié)果顯示二者呈線性相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r=0.99。 4.CCK 調(diào)節(jié)VMH 神經(jīng)元自發(fā)放電頻率的受體機制 我們用CCK-B 受體的激動劑胃泌素模擬CCK-8S 對VMH 神經(jīng)元放電頻率的作用。結(jié)

7、果發(fā)現(xiàn)胃泌素同樣可以增加其神經(jīng)元的放電頻率,放電頻率從（4±1）Hz 增加到（7±1）Hz（ P<0.05）。 主要結(jié)論： 1.VMH 神經(jīng)元具有多樣性的特征。 2.CCK-8S 對VMH 神經(jīng)元興奮性的調(diào)節(jié)具有選擇性，并通過提高大多數(shù)神經(jīng)元的興奮性使飽中樞興奮抑制食欲。 3.CCK-8S對IA電流的調(diào)節(jié)可能是其調(diào)控VMH神經(jīng)元整體興奮性的重要機制。 4.CCK-8S 可能是通過CCK-B 受體來