內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、自噬及miR-375在高糖高脂誘導(dǎo)的胰島β細(xì)胞凋亡中的作用探討.pdf

1、目的：
　　探討不同糖脂濃度時(shí)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、自噬及 miR-375表達(dá)的改變對(duì)大鼠胰島RINm5F細(xì)胞增殖、凋亡的影響；并通過(guò)利拉魯肽干預(yù)進(jìn)一步明確內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、自噬及miR-375對(duì)胰島β細(xì)胞凋亡及增殖的作用。
　　方法：
　　體外培養(yǎng) RINm5F細(xì)胞。分別采用5.5mM、16.7mM、33.3 mM葡萄糖濃度及0mM、0.25mM、0.5mM棕櫚酸濃度構(gòu)建不同的糖脂濃度，在單獨(dú)或聯(lián)合利拉魯肽（400nM）的條件下培養(yǎng)

2、RINm5F細(xì)胞24小時(shí)。采用Annexin V/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞的凋亡；利用CCK-8試劑盒檢測(cè)細(xì)胞增殖活性；QT-PCR檢測(cè)miR-375、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基因XBP-1、CHOPmRNA的表達(dá)；Western Blot方法檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白CHOP、自噬相關(guān)蛋白LC3-II、p62的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.Annexin V/PI及CCK-8檢測(cè)結(jié)果顯示，棕櫚酸抑制RINm5F細(xì)

3、胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，其作用與濃度相關(guān)；高濃度的葡萄糖對(duì)胰島β細(xì)胞的增殖無(wú)顯著作用。2.在相同葡萄糖濃度培養(yǎng)條件下，隨著棕櫚酸作用濃度的增加，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)基因CHOP mRNA以及XBP-1 mRNA的表達(dá)增加（P＜0.05）；在相同棕櫚酸濃度作用下，葡萄糖濃度增加對(duì)XBP-1mRNA的影響不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；但相較于5.5mM GLU組，33.3mM GLU組 RINm5F細(xì)胞的 CHOP mRNA的表達(dá)顯著增加（P＜0.05）。3. W

4、estern Blot檢測(cè)Caspase-3、CHOP、LC3-II、p62蛋白的表達(dá)，結(jié)果顯示在相同的葡萄糖濃度作用下，高濃度PA組的RINm5F細(xì)胞的Caspase-3、CHOP、LC3-II的表達(dá)較低濃度PA組明顯增加，p62的表達(dá)較低濃度PA組減少，并呈濃度依賴性（P＜0.05）；高糖加強(qiáng)棕櫚酸的作用。4.16.7mM以及33.3mM GLU組的miR-375的表達(dá)水平顯著低于5.5mMGLU組（P＜0.05）；在5.5mM G

5、LU組中，棕櫚酸可誘導(dǎo)RINm5F細(xì)胞miR-375的表達(dá)增加，并呈濃度依賴性（P＜0.05）。5.在33.3mM葡萄糖濃度及0.5mM棕櫚酸濃度培養(yǎng)條件下，利拉魯肽（400nM）干預(yù)增強(qiáng) RINm5F細(xì)胞的增殖活性，并減少其凋亡；同時(shí)胰島β細(xì)胞的miR-375、CHOP mRNA、XBP-1mRNA表達(dá)減少（P＜0.05），CHOP及Caspase-3蛋白表達(dá)減少，LC3-II表達(dá)增加，p62蛋白表達(dá)無(wú)明顯改變。
　　結(jié)論：

6、r>　　1.棕櫚酸抑制胰島β細(xì)胞增殖，促進(jìn)β細(xì)胞凋亡，其作用與濃度相關(guān)；高糖無(wú)顯著作用；
　　2.高糖高脂通過(guò)促進(jìn)胰島β細(xì)胞的ERS以及激活UPR誘導(dǎo)胰島β細(xì)胞凋亡；
　　3.高糖高脂通過(guò)增強(qiáng)胰島β細(xì)胞的自噬調(diào)控細(xì)胞的凋亡；
　　4.在低濃度葡萄糖培養(yǎng)條件下，棕櫚酸促進(jìn)miR-375的表達(dá)；高濃度葡萄糖抑制β細(xì)胞miR-375的表達(dá)；
　　5.利拉魯肽通過(guò)緩解內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、調(diào)控自噬以及減少miR-375的表達(dá)保護(hù)高