高精料日糧對(duì)反芻動(dòng)物乳腺組織細(xì)胞凋亡的影響以及日糧中添加丁酸鈉的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、在現(xiàn)代奶業(yè)生產(chǎn)中，為了提高奶產(chǎn)量，同時(shí)滿足泌乳早期和中期不斷增加的能量需求，常給奶?；蚰躺窖蝻曃垢呔?，這種飼喂方式會(huì)引起瘤胃異常發(fā)酵，進(jìn)而引起亞急性瘤胃酸中毒。瘤胃內(nèi)LPS蓄積并透過胃腸道到達(dá)全身循環(huán)系統(tǒng)包括乳腺，LPS可激活NF-κB信號(hào)通路，之后調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡。丁酸鈉有促進(jìn)胃腸道組織發(fā)育和增強(qiáng)其屏障功能的作用，本試驗(yàn)以泌乳中期荷斯坦奶牛和薩能奶山羊?yàn)樵囼?yàn)對(duì)象，探究高精料日糧對(duì)反芻動(dòng)物乳腺組織細(xì)胞凋亡的影響以及日糧中添加丁酸鈉的作用。

2、
　　試驗(yàn)一:高精料日糧對(duì)奶牛乳腺組織細(xì)胞凋亡的影響:本試驗(yàn)以12頭泌乳中期的荷斯坦奶牛為試驗(yàn)對(duì)象，隨機(jī)分為兩組，每組6只。其中一組飼喂低精料日糧，即日糧中含有40％的精料和60％的粗料，精粗比為4∶6，稱為LC組（Low Concentrate），作為對(duì)照組;另外一組飼喂高精料日糧，精粗比為6∶4，稱為HC組（High Concentrate），作為試驗(yàn)組。試驗(yàn)周期為18周，試驗(yàn)開始前為所有奶牛安裝瘤胃瘺管，試驗(yàn)后期采集瘤胃液、

3、奶、乳動(dòng)脈血、乳靜脈血和乳腺組織細(xì)胞樣品，測定瘤胃液pH值、奶產(chǎn)量和乳成分、瘤胃液和血漿中LPS含量、乳腺組織細(xì)胞中凋亡相關(guān)基因如caspase-3、caspase-8和caspase-9等的表達(dá)以及凋亡相關(guān)蛋白酶的活性和通路中NF-κB的蛋白表達(dá)。結(jié)果顯示:長期高精料飼喂使奶牛瘤胃pH值均值降低，pH值低于5.6的時(shí)間超過3 h;和低精料組相比，高精料組的奶產(chǎn)量和乳脂率和乳脂含量都極顯著下降（P＜0.01），乳蛋白率卻顯著提高（P＜0

4、.05）;高精料組瘤胃液和血漿中LPS含量都顯著高于低精料組(P＜0.01);高精料組caspase-3的基因表達(dá)顯著高于低精料組(P＜0.05)而bcl-2的基因表達(dá)顯著低于低精料組(P＜0.05);高精料組caspase-3和caspase-8的酶活性相比于低精料組都顯著升高(P＜0.01);高精料組NF-κB p65和磷酸化的NF-κBp65的蛋白表達(dá)量都顯著高于低精料組(P＜0.05)。結(jié)論是長期飼喂高精料誘發(fā)了奶牛乳腺組織細(xì)胞

5、的凋亡。
　　試驗(yàn)二:高精料日糧對(duì)奶山羊乳腺組織細(xì)胞凋亡的影響以及日糧中添加丁酸鈉的調(diào)節(jié)作用:本試驗(yàn)采用18頭泌乳中期的薩能奶山羊，隨機(jī)分為三組，每組6只。三組的飼喂方案如下:第一組飼喂低精料日糧，即日糧中含有40％的精料和60％的粗料，精粗比為4∶6，稱為LC組（Low Concentrate）;第二組飼喂高精料日糧，精粗比為6∶4，稱為HC組（High Concentrate）;第三組飼喂高精料日糧，精粗比為6∶4，并且在日糧

6、中添加丁酸鈉（Sodium Butyrate）一同飼喂，稱為BHC組。試驗(yàn)周期為20周，試驗(yàn)開始前為所有奶山羊安裝瘤胃瘺管和肝臟肝靜脈血管插管，試驗(yàn)后期采集瘤胃液、奶、肝靜脈血和乳腺組織細(xì)胞樣品，測定瘤胃液pH值、奶產(chǎn)量和乳成分、血漿中LPS和促炎性因子含量、乳腺組織細(xì)胞中凋亡相關(guān)基因如caspase-3、caspase-8、caspase-9、bcl-2和bax等的表達(dá)以及凋亡相關(guān)蛋白酶的活性。結(jié)果顯示:高精料日糧引起了瘤胃pH的下降

7、，添加丁酸鈉后瘤胃pH值有一定回升;HC組外周血中LPS的含量顯著高于LC組和BHC組(P＜0.01);HC組外周血中主要炎性因子IL-1β，IL-6，TNF-α的含量都顯著高于LC組和BHC組(P＜0.05); HC組caspase-3基因的表達(dá)和蛋白酶活性都顯著高于LC組和BHC組(P＜0.01)。結(jié)論是高精料日糧引起了奶山羊乳腺細(xì)胞凋亡，日糧中添加丁酸鈉一定程度上緩解了凋亡情況。
　　試驗(yàn)三:高精料日糧對(duì)奶山羊乳腺組織細(xì)胞凋

8、亡信號(hào)通路中相關(guān)蛋白表達(dá)的影響以及日糧中添加丁酸鈉的調(diào)節(jié)作用:采用18頭泌乳中期的薩能奶山羊，隨機(jī)分為三組，每組6只。三組的飼喂方案如下:第一組飼喂低精料日糧，即日糧中含有40％的精料和60％的粗料，精粗比為4∶6，稱為LC組（Low Concentrate）;第二組飼喂高精料日糧，精粗比為6∶4，稱為HC組（High Concentrate）;第三組飼喂高精料日糧，精粗比為6∶4，并且在日糧中添加丁酸鈉（Sodium Butyrate

9、）一同飼喂，稱為BHC組。試驗(yàn)周期為20周，試驗(yàn)后期采集乳腺組織細(xì)胞樣品。用western blot方法檢測通路中相關(guān)蛋白如NF-κB、bax、bcl-2、cytochrome C和caspase-3原型和激活型的表達(dá)。結(jié)果顯示:HC組奶山羊乳腺組織細(xì)胞中p65的蛋白表達(dá)量顯著高于LC組和BHC組，并且和LC組相比，BHC組的p65蛋白表達(dá)量顯著下調(diào);對(duì)于磷酸化的p65，HC組含量顯著高于LC組和BHC組;BHC組bax的蛋白表達(dá)量顯著

10、低于LC組和HC組;BHC組的bcl-2蛋白表達(dá)量顯著高于LC組和HC組;HC組cytochromeC的蛋白含量顯著高于LC組和BHC組;對(duì)于caspase-3原型，HC組表達(dá)量顯著高于LC組和BHC組，但是LC組和BHC組之間并無顯著差異;對(duì)于激活型的caspase-3，BHC組表達(dá)量顯著低于LC組和HC組。結(jié)論是高精料飼喂引起了奶山羊乳腺組織細(xì)胞p65和磷酸化的p65表達(dá)量的升高，并引起了促凋亡相關(guān)蛋白如bax、cytochrome