高精料日糧對(duì)反芻動(dòng)物肝臟NOD樣受體表達(dá)的影響和調(diào)控.pdf

1、我國(guó)是人口大國(guó)，隨著近年來(lái)經(jīng)濟(jì)騰飛帶來(lái)的物質(zhì)生活水平提高，人們對(duì)乳產(chǎn)品尤其是牛奶的需求量越來(lái)越大。然而我國(guó)優(yōu)質(zhì)牧草資源匱乏，無(wú)法滿(mǎn)足畜牧生產(chǎn)的要求，所以為了提高奶牛泌乳期間的營(yíng)養(yǎng)水平，通常在日糧中添加碳水化合物含量高的精料。高精料日糧容易導(dǎo)致亞急性瘤胃酸中毒（SARA）的產(chǎn)生，并繼發(fā)一系列營(yíng)養(yǎng)代謝性疾病。SARA條件下，瘤胃內(nèi)環(huán)境發(fā)生改變，部分瘤胃微生物尤其是革蘭氏陰性菌崩解產(chǎn)生脂多糖、肽聚糖等異常代謝產(chǎn)物，被吸收入血經(jīng)門(mén)靜脈進(jìn)入肝臟。

2、NOD樣受體是機(jī)體天然免疫的重要組成部分，肽聚糖的分解產(chǎn)物可以被肝臟組織中NOD樣受體特異性結(jié)合，激活相應(yīng)的信號(hào)通路，誘導(dǎo)炎性反應(yīng)的發(fā)生。本試驗(yàn)選用12頭泌乳中期的荷斯坦奶牛，采用pH值測(cè)量、實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)、蛋白印跡法(Western Blot)等方法，研究高精料日糧條件對(duì)反芻動(dòng)物肝臟中NOD樣受體表達(dá)的影響。此外，還選用18頭泌乳中期的奶山羊，在高精料日糧中添加緩沖劑，研究綜合調(diào)控對(duì)SARA的緩解作用以及NOD樣受體表

3、達(dá)情況的變化。本試驗(yàn)主要分為兩個(gè)部分:
　　試驗(yàn)一:選用了12頭處于泌乳中期的的奶牛，隨機(jī)分為兩組，分別飼喂高精料（High concentrate，HC）日糧（精粗比6∶4）和低精料(Low concentrat，LC)日糧（精粗比4∶6）來(lái)研究高精料日糧條件下，反芻動(dòng)物瘤胃中肽聚糖的分解產(chǎn)物DAP和MDP對(duì)肝臟NOD樣受體信號(hào)通路的影響。奶牛在飼喂后0-12h通過(guò)瘤胃瘺管采取瘤胃液，用pH計(jì)測(cè)量瘤胃液的pH值。飼喂20周后屠宰

4、，采取肝臟組織樣品。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)對(duì)肝臟組織中的轉(zhuǎn)錄因子NF-κB進(jìn)行測(cè)量，并檢測(cè)IL-1β、IL-6、TNF-α等炎性因子以及NOD1、NOD2受體的基因相對(duì)表達(dá)量。采用蛋白印跡法(Western Blot)檢測(cè)奶牛肝臟組織中NF-κB的p65蛋白和p-p65蛋白的表達(dá)量。比較高精料組和低精料組的差異，并分析其原因。
　　結(jié)果:飼喂后高精料組瘤胃液的pH值顯著降低，pH值小于5.6的時(shí)間更長(zhǎng);NF-κB的相對(duì)

5、基因表達(dá)量高精料組高于低精料組，且差異極顯著;炎性基因表達(dá)量高精料組均高于低精料組，IL-1β、IL-6差異極顯著，TNF-α差異顯著;NOD1受體的相對(duì)基因表達(dá)量高精料組明顯高于低精料組，差異極顯著;NOD2受體的相對(duì)基因表達(dá)量差異不顯著;蛋白水平上，p65和p-p65的蛋白表達(dá)量高精料組均高于低精料組，p65差異極顯著，p-p65差異顯著。
　　試驗(yàn)二:試驗(yàn)選用18頭泌乳中期奶山羊，在高精料日糧中加入緩沖劑進(jìn)行綜合調(diào)控試驗(yàn)，探

6、究綜合調(diào)控能否降低高精料日糧對(duì)SARA的影響，以及反芻動(dòng)物肝臟中的NOD樣受體表達(dá)量的變化情況。將18頭實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分成3組，分別飼喂低精料日糧（精粗比4∶6）、高精料日糧（精粗比6∶4）、高精料日糧+緩沖劑，即低精料組、高精料組和調(diào)控組。安裝瘤胃瘺管恢復(fù)健康后，測(cè)量每天進(jìn)食后0-10h瘤胃pH值。運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)量三組奶山羊肝臟中的NOD1、NOD2受體，轉(zhuǎn)錄因子NF-κb以及炎性因子IL-1、IL-6、TNF-α相對(duì)基因表達(dá)