無(wú)花果曲霉產(chǎn)單寧酶發(fā)酵條件優(yōu)化、酶學(xué)性質(zhì)及其固定化研究.pdf

1、本研究利用無(wú)花果曲霉Gim3.6作為生產(chǎn)菌株,采用五倍子生料發(fā)酵方法獲得單寧酶,并對(duì)發(fā)酵工藝條件進(jìn)行優(yōu)化,利用反膠團(tuán)體系萃取單寧酶,并進(jìn)一步對(duì)其酶學(xué)性質(zhì)及固定化進(jìn)行研究。
　　以五倍子作為誘導(dǎo)底物,通過(guò)固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)單寧酶并對(duì)工藝條件進(jìn)行優(yōu)化,優(yōu)化結(jié)果為:以氯化銨為氮源、麩皮為碳源,初始pH為5.0,培養(yǎng)基裝量為5g,五倍子0.55g、培養(yǎng)溫度30℃、接種量1.22mL。在此條件下通過(guò)72h的恒溫培養(yǎng),單寧酶活力可達(dá)28.64 U/

2、gds。
　　利用CTAB/正丁醇/異辛烷反膠團(tuán)體系萃取單寧酶并優(yōu)化工藝參數(shù),最佳萃取工藝為:前萃取 CTAB濃度50mmol/L,助溶劑添加量為1/5,震蕩時(shí)間15min,萃取溫度45℃;反萃取水相 pH3.8,正辛醇添加量3mL,兩相比例1:1,混合時(shí)間10min,氯化鈉濃度為0.25mol/L。在上述條件下,經(jīng)過(guò)一個(gè)萃取和反萃取循環(huán)后,單寧酶的酶活回收率可達(dá)75.5％,純化倍數(shù)為5.64。
　　無(wú)花果曲霉 Gim3.6

3、產(chǎn)單寧酶的酶學(xué)性質(zhì)為:最適溫度為40℃,最適pH為6.0。Fe3+,Ba2+的添加對(duì)酶活力影響不大,Fe2+則會(huì)有輕微的促進(jìn)作用。Mg2+、Al3+和EDTA對(duì)單寧酶都有抑制作用。以沒(méi)食子酸丙酯為底物時(shí),單寧酶米氏常數(shù) Km為0.6144mmol/L,最大反應(yīng)速度為Vmax=65.359μmol/L?min。
　　單寧酶最佳的固定化工藝為:殼聚糖濃度1.5%,海藻酸鈉濃度2%,戊二醛濃度0.2%,鈣離子濃度為0.25mol/L,交