產(chǎn)低溫脂肪酶菌株發(fā)酵條件優(yōu)化及酶學(xué)性質(zhì)的初步研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)從邯鄲含油土壤中采集樣品，經(jīng)過(guò)初篩，分離出多株產(chǎn)脂肪酶的菌株，再進(jìn)行復(fù)篩，其中5株酶活較高，測(cè)定其最適反應(yīng)溫度和0℃的酶活，選出1株菌株，最適反應(yīng)溫度為30℃，且0℃時(shí)的酶活最高，確定該菌株產(chǎn)低溫脂肪酶，并命名為HEBUST LIP-L。再對(duì)該菌株進(jìn)行形態(tài)學(xué)和部分生理生化特征分析，將HEBUST LIP-L初步鑒定為假單胞菌(Pseudomonas sp.)。
　　對(duì)可能影響Pseudomonas sp.HEBUST LIP-

2、L產(chǎn)酶的7個(gè)因素即糊精、蛋白胨、KCl、橄欖油、Tween80、初始pH及接種量進(jìn)行全面考察，選用Plackett-Burman、最陡爬坡實(shí)驗(yàn)與響應(yīng)面法相結(jié)合的實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)方法，快速而有效地篩選出3個(gè)主效因子（蛋白胨、橄欖油、Tween80），進(jìn)而得到產(chǎn)脂肪酶的最佳組合:蛋白胨26.4 g/L、橄欖油16.95 mL/L、Tween8025.6 mL/L、糊精7.5 g/L、KCl3mmol/L、pH7.0、接種量8％，脂肪酶的產(chǎn)量達(dá)到46

3、.08 U/mL，比優(yōu)化前提高98％。該模型能很好的預(yù)測(cè)發(fā)酵情況，科學(xué)指導(dǎo)酶生產(chǎn)。
　　將Pseudomonas sp.HEBUST LIP-L所產(chǎn)粗酶液依次進(jìn)行雙水相萃取體系（PEG2000濃度為15.0％，K2HPO4濃度為20.0％，pH值為7.0）、DEAE-纖維素離子交換層析和Sephadex G-100葡聚糖凝膠柱層析實(shí)驗(yàn)，分離純化出達(dá)到電泳純的脂肪酶，并測(cè)定出該脂肪酶的相對(duì)分子量為35 kDa，最適反應(yīng)pH值為9.5