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文檔簡介
1、背景:
脊髓缺血再灌注損傷(spinal cord ischemic in-jury,SCII)是指當脊髓受到一定的損傷因子攻擊時,脊髓神經(jīng)細胞會缺血一段時間,導致氧供應不足,盡管后來血液重新灌注,但是卻引起了明顯的功能缺失,有時候甚至出現(xiàn)了遲發(fā)型神經(jīng)元死亡,這種死亡是不可逆轉(zhuǎn)的。在臨床的手術中,SCII一直是困擾臨床醫(yī)生的一大難題,而預防SCII的方法的研究也越來越重要。
目前,甲強龍(MP)已被國內(nèi)外醫(yī)學
2、界認為有確切療效并得到廣泛應用的藥物。我們在脊髓手術之前使用大劑量MP沖擊治療來預防脊髓損傷,并已經(jīng)取得了確切的療效,病人脊髓損傷癥狀明顯減輕。
通過對使用大劑量MP的病人的長期隨訪,我們發(fā)現(xiàn),雖然病人脊髓損傷明顯減輕,但此類病人大劑量激素使用后的并發(fā)癥遠較其他病人為高,同樣給病人造成了極大的痛苦。這給臨床醫(yī)生提出了新的難題。
目前,使用何種方法在預防SCII的同時能夠盡可能地減少其并發(fā)癥已成為了醫(yī)學界新的研
3、究方向。這些年來,葛根素作為一種傳統(tǒng)中藥受到了越來越多的研究,以前的葛根素主要因其擴血管作用而在臨床使用,現(xiàn)在很多實驗都證明葛根素還有明顯的減輕SCII的作用,且作用較其它很多藥物明顯。本實驗采用成組設計的方法,觀察低劑量MP與葛根素聯(lián)用對SCII后脂質(zhì)過氧化反應的影響,以及功能學和組織學上的改變,通過與大劑量MP的對比,探討其對SCII的保護作用。
目的:
通過研究低劑量MP聯(lián)用葛根素與單用大劑量MP預防S
4、CII的療效的對比,為減少臨床激素的應用提供依據(jù)。
材料與方法:
1、實驗動物及分組
清潔SD大鼠80只隨機分為4組:空白組、模型組、陽性藥組、治療組,每組20只??瞻捉M僅手術暴露腹主動脈[7];其它組均通過夾閉腎下腹主動脈30min[8]造成脊髓缺血再灌注損傷,陽性藥組于損傷前30min尾靜脈注射30mg/kg MP.治療組于損傷前30min尾靜脈注射10mg/KgMP并30mg/Kg的葛根素
5、,模型組于損傷前30min尾靜脈注射與MP組等容量的生理鹽水。
2、模型制作及標本制備
10%水合氯醛3ml/kg腹腔注射麻醉陽[9]。應嚴格遵守無菌操作原則,找出左右腎動脈,然后于兩動脈之間夾閉腹主動脈30min后松開恢復血流??瞻捉M于術后3h,后三組均于缺血再灌注后3h各取10只大鼠處死。取出腰段脊髓,勻漿后檢測SOD、Na-KATP酶表達水平?;謴脱鞴嘧?4 h以后,進行后肢運動功能評分,然后處死剩余
6、10大鼠,立即取出結(jié)扎部位以下脊髓,將其放置于4%多聚甲醛中固定。常規(guī)石蠟包埋、連續(xù)橫切片,行HE染色。
3、觀察指標與方法
3.1、后肢神經(jīng)功能評分
后肢神經(jīng)功能評分采用BBB評分標準[10]
3.2、SOD、Na-KATP酶的檢測
將提取的一段脊髓攪拌均勻,離心后取上清液,按試劑盒使用說明進行操作,測定最終反應產(chǎn)物的吸光度。
3.3、HE染色
7、 松開夾子24h后將動物處死,從背部結(jié)扎部位以下依次分離軟組織層,咬除棘突、椎板,取出脊髓,然后放入4%多聚甲醛中,12小時后行石蠟包埋切片,HE染色后光學顯微鏡下觀察。
4、統(tǒng)計學處理
用SPSS17.0統(tǒng)計分析軟件處理實驗數(shù)據(jù),所有數(shù)據(jù)均用(x)±s表示,采用單因素方差分析四組間的整體差異,采用q檢驗比較組間兩兩差異,P<0.05認為差異有統(tǒng)計學意義。
結(jié)果:
1、后肢功
8、能評分
后肢運動功能顯示:與空白組相比,其它三組運動功能均明顯減低,其中陽性藥組、治療組評分明顯高于模型組,且差異具有統(tǒng)計學意義(p<0.05),陽性藥組和治療組之間進行比較,兩組之間沒有明顯差異(p>0.05)。
2、SOD、Na-KATP酶表達水平
與空白組相比,再灌注3h后其他三組SOD、Na-KATP酶表達水平均明顯減低,但模型組表達水平低于陽性藥組、治療組,差異具有統(tǒng)計學意義(p<0.
9、05),陽性藥組和治療組進行比較,兩組之間SOD、Na-KATP酶均沒有明顯差(p>0.05)。
3、HE染色
陽性藥組和治療組細胞損傷明顯低于模型組,陽性藥組和治療組未見明顯差異。
結(jié)論:
低劑量MP與葛根素聯(lián)用和大劑量MP都可以有效預防SCII,且兩者作用相當,在以后的臨床手術中,我們完全可以使用低劑量MP與葛根素聯(lián)用取代目前的大劑量MP的應用,從而大大減少了大量激素產(chǎn)生的副作
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