尼克酰胺對糖尿病狀態(tài)下大鼠心肌微血管形成的影響.pdf

1、第一部分：尼克酰胺抑制PKC-βⅡ活性改善高糖導(dǎo)致的心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞血管形成障礙
　　目的：探討尼克酰胺對高糖導(dǎo)致的微血管生成障礙的影響及可能機制。
　　方法：分離培養(yǎng)原代心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞，取第2代細(xì)胞進行實驗，分為正常糖組（NG，5.6 mmol/L）、高糖組（HG，33.3 mmol/L）、高糖+尼克酰胺組(HG+N，33.3 mmol/L+20 mmol)和高糖+ PKC-βⅡ抑制劑 LY333531組(HG+LY

2、，33.3 mmol/L+20 nmol)，培養(yǎng)24小時后，通過Matrigel，Transwell和CCK-8試驗分別觀察細(xì)胞的管腔形成、遷移及增殖情況。Western blot檢測細(xì)胞蛋白激酶C-βII（protein kinase C-βII，PKC-βII）、磷酸化 PKC-βII(Thr641)、蛋白激酶 B（Akt）、磷酸化 Akt（Ser473）（p-Akt）、內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric ox

3、ide syntheses，eNOS)和磷酸化 eNOS（Ser1117）（p-eNOS）蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：與NG組相比，HG組細(xì)胞的管腔形成、遷移和增殖能力明顯降低（P均<0.05）；而與 HG組相比，HG+N組和HG+LY組細(xì)胞的管腔形成、遷移和增殖能力均得到明顯改善（P均<0.05）。Western blot結(jié)果顯示：與NG組相比，HG組 PKC-βⅡ磷酸化程度上調(diào)，并伴隨 Akt及 eNOS磷酸化水平降低（P均<

4、0.05）。Nicotinamide抑制了高糖導(dǎo)致的PKC-βⅡ磷酸化程度上調(diào)，并恢復(fù)Akt、eNOS磷酸化至NG組水平（P<0.05）。
　　結(jié)論：尼克酰胺可以改善高糖導(dǎo)致的心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞血管形成障礙，其機制可能與抑制PKC-βⅡ的磷酸化，進而上調(diào)Akt/eNOS通路活性有關(guān)。
　　第二部分：尼克酰胺對糖尿病大鼠心肌梗死后微血管形成及心功能的影響
　　目的：探討尼克酰胺對糖尿病大鼠心肌梗死后微血管形成及心功能的影

5、響。
　　方法：腹腔注射鏈脲佐菌素50mg/kg制作1型糖尿病大鼠模型，將血糖達(dá)標(biāo)的大鼠通過結(jié)扎冠狀動脈左前降支的方法制備糖尿病大鼠心肌梗死模型。將存活的大鼠隨機分組：心肌梗死組（MI，n=18）和尼克酰胺組（NIC，n=18），另設(shè)假手術(shù)組（sham，n=18），假手術(shù)組只在心臟相同位置穿線但不結(jié)扎。心肌梗死24小時后，NIC組給予尼克酰胺40mg/(kg·d)灌胃，MI組和假手術(shù)組給予相同體積的生理鹽水替代，連續(xù)灌胃28天。心

6、肌梗死28天后行心臟超聲檢查、Masson染色、免疫組化及Western blot檢測。
　　結(jié)果：心肌梗死28天后，與sham組相比，MI組收縮期室間隔厚度（IVSs）和舒張期室間隔厚度（IVSd）明顯減小，左室收縮末內(nèi)徑（LVIDs）和左室舒張末內(nèi)徑（LVIDd）明顯增大，左室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）和縮短分?jǐn)?shù)（FS）明顯減少（P均<0.05）。與 MI組相比，NIC組上述指標(biāo)均明顯改善（P均<0.05），并且大鼠心肌梗死面積顯著

7、減少，心肌梗死周圍區(qū)微血管密度及 VEGF表達(dá)明顯增加（P均<0.05）。Western blot結(jié)果顯示：與sham組相比，MI組PKC-βⅡ磷酸化程度上調(diào)，且伴隨 Aktser473及 eNOSser1117磷酸化水平降低（P均<0.05）。與MI組相比，NIC組PKC-βⅡ磷酸化水平減少，并且Aktser473及eNOSser1117磷酸化水平增加（P均<0.05）。
　　結(jié)論：尼克酰胺可以促進糖尿病大鼠心肌梗死后的微血管形