氯喹對阿爾茨海默癥中APP代謝分子機(jī)制研究.pdf

1、第一部分：中國人群中載脂蛋白E基因型多態(tài)性與阿爾茨海默癥相關(guān)性的探討
　　目的：研究載脂蛋白E（Apo E）基因型多態(tài)性在中國人群中的分布特征，以及阿爾茨海默癥（AD）患者與健康人群中載脂蛋白E基因型的分布情況，探討在中國人群Apo E基因型多態(tài)性與AD之間的相關(guān)性，預(yù)測發(fā)生AD疾病的可能性，為預(yù)防AD提供依據(jù)。
　　材料和方法：檢測4251名正常人、404名AD患者及其年齡相對應(yīng)的390名健康人的Apo E基因分型。采用全

2、血提取DNA；限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)（PCR-RFLP）；瓊脂糖凝膠電泳；HinP1Ⅰ限制性內(nèi)切酶酶切；非SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳；銀染等實(shí)驗(yàn)方法。
　　結(jié)果：結(jié)果表明,在正常人群中，ε3等位基因頻率最高(82%),其次是ε4(6.25%)和ε2(11.75%)。ε3/ε3基因型攜帶者為最常見(64.19%)，ε4/ε4為頻率最低(0.59%)。在 AD與對照人群中，ApoEε4等位基因頻率(15.35%)顯著高于對照

3、組(10.00%)。
　　結(jié)論：攜帶兩個ε4等位基因具有高于5倍的幾率發(fā)展為AD患者，我們的研究證實(shí)在中國人群中ApoEε4為AD的高風(fēng)險(xiǎn)因素。
　　第二部分：氯喹對阿爾茨海默癥中APP代謝的分子機(jī)制研究
　　目的：神經(jīng)退行性疾病是一類以中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元進(jìn)行性損傷及死亡導(dǎo)致運(yùn)動功能障礙和認(rèn)知功能受損為特征的一類疾病。神經(jīng)退行性疾病已成為第四位死亡原因。阿爾茨海默癥(Alzheimer’s Disease, AD)作為

4、常見的神經(jīng)退行性疾病之一，已在世界范圍內(nèi)嚴(yán)重影響人類的健康及經(jīng)濟(jì)狀況。雖然針對 AD的基礎(chǔ)研究和臨床實(shí)驗(yàn)眾多，但其發(fā)病機(jī)制至今未明。近年有研究表明氯喹作為自噬調(diào)節(jié)劑用于神經(jīng)退行性疾病的治療很有探索價(jià)值。但目前關(guān)于氯喹在神經(jīng)退行性疾病 AD治療中的作用還沒有大量的研究。本研究通過體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)探索氯喹對阿爾茨海默癥中APP代謝的分子機(jī)制。
　　材料和方法：在不同細(xì)胞系(SH-SY5Y,2EB2,20E2)分別用不同濃度的氯喹藥物干預(yù)

5、，檢測其對β淀粉樣蛋白前體(amyloid precursor protein,APP)的切割的影響。在 APP23/PS45雙轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)用氯喹藥物干預(yù)。將6周齡的陽性轉(zhuǎn)基因小鼠隨機(jī)分為對照組和實(shí)驗(yàn)組（藥物干預(yù)組）。實(shí)驗(yàn)組給予氯喹藥物50mg/kg腹腔注射，對照組給予等計(jì)量的PBS緩沖液，連續(xù)4周。通過Morris水迷宮行為學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測藥物對小鼠空間學(xué)習(xí)與記憶能力的影響。再通過Western blotting，ELISA，免疫組化實(shí)驗(yàn)

6、分別檢測氯喹對APP的切割及淀粉樣蛋白Aβ的影響。
　　結(jié)果：體外實(shí)驗(yàn)中，隨著氯喹藥物濃度的增加，2EB2細(xì)胞中 APP無明顯變化，APP切割產(chǎn)物CTF以C89顯著增加為主，BACE1水平顯著增加。20E2細(xì)胞中APP及切割產(chǎn)物CTF均顯著增加。SH-SY5Y細(xì)胞中APP及切割產(chǎn)物CTF，ADAM10，BACE1蛋白水平顯著增加，但 PS1蛋白無明顯變化。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，與對照組比較，實(shí)驗(yàn)組（藥物干預(yù)組）小鼠隱蔽平臺逃避潛伏期和活動總

7、路徑無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，穿越平臺所在象限的次數(shù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。腦組織內(nèi)APP，β-CTF，α-CTF，BACE1蛋白水平均增加，PS1無變化，Aβ40/Aβ42水平減少和老年斑的數(shù)量顯著減少。
　　結(jié)論：我們發(fā)現(xiàn)氯喹在體外或體內(nèi)均對 APP切割代謝有影響。在APP23/PS45的AD模型小鼠中，氯喹可以減少Aβ從而減少老年斑的沉積，但未發(fā)現(xiàn)氯喹可以改善 AD模型小鼠學(xué)習(xí)和記憶障礙。我們的研究表明氯喹可能作為治療 AD一種潛