肥胖及飲食控制對哮喘發(fā)生的影響及機(jī)制探討.pdf

1、第一部分 Ob/ob基因敲除誘導(dǎo)的肥胖對肺部炎癥和氣道重塑的影響
　　目的:以ob/ob基因敲除小鼠為肥胖模型，觀察基因敲除誘導(dǎo)的肥胖對肺組織炎癥和氣道重塑的影響。
　　方法:購買于北京公司的ob/ob基因敲除C57BL/6J雄性小鼠為肥胖組，野生型的雄性小鼠為正常組。采用肺組織HE染色法觀察肥胖對小鼠肺組織炎癥的影響，α-SMA免疫組化和masson染色檢測肥胖對肺組織重塑的影響。
　　結(jié)果:ob/ob基因敲除誘導(dǎo)的

2、肥胖小鼠模型，肺組織HE染色及炎癥細(xì)胞定量分析，發(fā)現(xiàn)肥胖小鼠支氣管周圍炎癥細(xì)胞較正常組明顯增加，但肺泡周圍炎癥細(xì)胞在兩組之間無明顯差異;小鼠肺組織α-SMA免疫組化及平均光密度值定量分析結(jié)果顯示，肥胖小鼠支氣管周圍平滑肌動蛋白表達(dá)明顯陽性;masson染色圖片及平均光密度值定量分析示肥胖組較正常組支氣管周圍膠原沉積明顯，但在肺泡周圍無明顯變化。
　　結(jié)論:ob/ob基因敲除誘導(dǎo)的肥胖可明顯增加小鼠肺組織炎癥細(xì)胞浸潤及促進(jìn)組織重塑。

3、
　　第二部分早期營養(yǎng)過剩誘導(dǎo)的肥胖增加哮喘小鼠肺部炎癥和氣道反應(yīng)性
　　目的:通過觀察肥胖對哮喘肺組織炎癥和氣道反應(yīng)性的影響，進(jìn)一步探討早期營養(yǎng)過剩誘導(dǎo)的肥胖對哮喘病理生理的影響。
　　方法:通過早期營養(yǎng)過剩的方法建立肥胖小鼠模型，實驗組采用腹腔注射致敏及霧化吸入激發(fā)雞卵白蛋白(OVA)的方法建立哮喘模型，對照組采用腹腔注射及霧化吸入等量的生理鹽水，分別為肥胖哮喘組、單純哮喘組、單純肥胖組和正常對照組。最后一次激發(fā)后

4、行肺功能測定檢測肥胖對哮喘氣道反應(yīng)性的影響，分析灌洗液中炎癥細(xì)胞總數(shù)和分類、肺組織HE染色檢測肥胖對哮喘炎癥的影響。
　　結(jié)果:1）哮喘小鼠氣道反應(yīng)性明顯高于對照組，肥胖哮喘小鼠較單純早期營養(yǎng)過剩誘導(dǎo)的肥胖組和哮喘組小鼠的氣道反應(yīng)性明顯升高（P均＜0.05）。2）與哮喘組和肥胖組相比，肥胖哮喘組灌洗液炎癥細(xì)胞總數(shù)和分類炎均明顯升高（P均＜0.05），與對照組相比，單純肥胖組炎癥細(xì)胞總數(shù)和巨噬細(xì)胞增多（P均＜0.05），其他炎癥細(xì)胞

5、無差異（P均＞0.05）。3）與肥胖組相比，肥胖哮喘組支氣管周圍和肺泡間隙炎癥細(xì)胞明顯增多（P均＜0.05），與哮喘組相比，僅表現(xiàn)為支氣管周圍炎癥細(xì)胞增多(P＜0.05)。
　　結(jié)論:肥胖可明顯的增加哮喘小鼠的氣道反應(yīng)性及肺組織炎癥。
　　第三部分飲食控制部分逆轉(zhuǎn)肥胖導(dǎo)致的肺部炎癥、氣道高反應(yīng)和重塑
　　目的:為探討肥胖對哮喘發(fā)生影響的機(jī)制，采用飲食限制建立飲食干預(yù)小鼠模型，觀察飲食控制能否逆轉(zhuǎn)早期營養(yǎng)過剩誘導(dǎo)的肥胖導(dǎo)

6、致的肺組織炎癥、氣道高反應(yīng)和重塑。
　　方法:采用小窩喂養(yǎng)模擬嬰兒期肥胖，導(dǎo)致早期營養(yǎng)過剩建立肥胖模型，肥胖組小鼠(SL)在生后第3天調(diào)為三只/籠，而正常組小鼠(NL)則調(diào)為10只/籠，母乳喂養(yǎng)三周后離乳，離乳后均給予自由飲食飲水。35天起，每天稱取每只小鼠每日的進(jìn)食量，連續(xù)監(jiān)測10天，自45天起將肥胖組小鼠分為自由飲食組(SL/AL)和飲食控制組(SL/FR)小鼠，控制組小鼠的進(jìn)食量為每只小鼠平均每天進(jìn)食量的2/3，直至150天

7、。150天齡時采用乙酰甲膽堿激發(fā)檢測各組小鼠的氣道反應(yīng)性;眼球取血，采用ELISA方法檢測血清中VEGF、TGF-β1、TNF-α、IL-6、IL-10、leptin和insulin等因子的水平。隨后取肺泡灌洗液行細(xì)胞總數(shù)、分類計數(shù)及炎癥因子TGF-β1和IL-10的檢測;HE染色、masson染色、α-SMA組化、MMP9蛋白表達(dá)、TGF-β1、CTGF、VEGF、IL-10、TNF-α和IL-6基因水平檢測肺組織炎癥和重塑的變化。<

8、br>　　結(jié)果:適宜的飲食控制可明顯降低肥胖小鼠的體重、改善高胰島素血癥及糖耐量等代謝指標(biāo);飲食控制可明顯減弱肥胖誘導(dǎo)的氣道高反應(yīng)及肺泡周圍的炎癥細(xì)胞浸潤，同時伴IL-6和leptin的降低，對支氣管周圍炎癥及TNF-α表達(dá)并無明顯影響;飲食控制可明顯降低肥胖導(dǎo)致的高IL-10及Treg細(xì)胞水平;飲食干預(yù)可明顯降低肥胖導(dǎo)致的支氣管周圍膠原的沉積及重塑相關(guān)的VEGF，CTGF和MMP-9的表達(dá)，但對肺組織中TGF-β1基因表達(dá)無明顯影響。