牙周炎對肥胖小鼠腎臟病變的影響及其機制探討.pdf

1、許多研究都已分別證實肥胖與慢性腎病具有相關(guān)性、牙周炎與慢性腎病具有相關(guān)關(guān)系。但尚缺乏在肥胖這種代謝異常狀態(tài)下牙周病對腎臟影響的直接證據(jù)。本研究使用牙周炎復(fù)合肥胖小鼠模型，旨在探討在肥胖狀態(tài)下，牙周炎是否對腎臟病變的產(chǎn)生存在影響及其可能的機制。為牙周炎是否影響腎臟疾病的發(fā)生尋找直接的證據(jù)。為臨床多學(xué)科聯(lián)合診斷，治療和預(yù)防提供依據(jù)。本文內(nèi)容共分為三部分:
　　一、牙周炎對肥胖小鼠腎臟損害的影響
　　目的:建立飲食誘導(dǎo)型肥胖伴實驗

2、性牙周炎的小鼠模型，研究牙周炎對肥胖小鼠腎臟功能及腎臟病損是否存在影響。
　　方法:275只小鼠隨機分為高脂飼料組(HF組)和低脂飼料組（LF組）兩組。飼料誘導(dǎo)時間分為8周、16周、30周三個時間點。每個飼料誘導(dǎo)時間結(jié)束時，再將每個飼料組分為牙周炎組（P組）和非牙周炎組（對照組，C組），P組采用絲線結(jié)扎法誘導(dǎo)實驗性牙周炎，C組做假性結(jié)扎對照處理。處死小鼠取材。取30周小鼠，檢測血清腎功能指標血清總蛋白、白蛋白、血尿素氮、肌酐，并對

3、組織切片行HE染色及三種特殊染色（MASSON染色、PAS染色、改良六胺銀染色）。
　　結(jié)果:HF組比LF組血清總蛋白、白蛋白水平均有顯著下降。而HFP和HFC兩組間無明顯差異，同樣，LF組有無牙周炎干預(yù)（LFP和LFC），二者之間也沒有明顯差異。HFP組的血清肌酐明顯高于LFP和LFC，而HFC、LFP和LFC三組之間無明顯差異，HFP和HFC之間也無明顯差異。HF組的血清尿素氮數(shù)值偏高，但四組之間沒有統(tǒng)計學(xué)差異。腎組織病理改變

4、可見LFP組織學(xué)特征與LFC接近，表現(xiàn)為正常腎臟的組織學(xué)特點。HFP和HFC組小鼠可見腎小球局灶性毛細血管袢消失，系膜細胞增生，腎小球基底膜及球周纖維增生。腎小管上皮細胞玻璃樣或空泡變性，管間質(zhì)纖維增生。以上病理特征在HFP組與HFC組小鼠情況近似，但HFP組的腎小管間質(zhì)纖維增生更為嚴重。
　　結(jié)論:本研究成功建立了不同程度的飲食誘導(dǎo)型肥胖復(fù)合牙周炎的小鼠模型。正常小鼠患單純牙周病并不會導(dǎo)致腎臟損害，肥胖才是腎臟損害的主要因素。在

5、DIO30周這種嚴重肥胖的情況下，牙周炎可能會加劇腎小管間質(zhì)纖維化的病變。
　　二、不同肥胖/牙周炎癥狀態(tài)下對腎臟損害的差異
　　目的:利用DIO8周、16周、30周及牙周感染5d、10d小鼠，探索在不同肥胖狀態(tài)下及不同牙周炎癥狀態(tài)下，牙周感染對肥胖小鼠腎臟損害的影響。
　　方法:對所有分組小鼠組織切片行HE染色及三種特殊染色（MASSON染色、PAS染色、改良六胺銀染色）。
　　結(jié)果:從DIO8周至16周至30

6、周，肥胖小鼠腎小球均有系膜細胞增生和毛細血管基底膜增厚，嚴重程度近似，但受累腎小球數(shù)目及范圍增加，腎小管上皮細胞均有空泡變性，范圍逐漸擴大。腎小球周纖維增生逐漸加重，腎小管間質(zhì)纖維化程度加重、范圍加大。DIO16周小鼠牙周感染10d與5d腎臟病變無明顯區(qū)別，30周小鼠牙周感染10d比5d腎小管間質(zhì)纖維化程度更加嚴重。
　　結(jié)論:隨著肥胖狀態(tài)增加，腎臟損害加重。可能在DIO30周這種重度肥胖狀態(tài)下，小鼠牙周感染時間越長，對腎小管間質(zhì)

7、纖維化的影響越大。
　　三、牙周炎影響腎臟損害的可能機制
　　目的:檢測各組小鼠腎臟組織中TGF-β1，MMP-2，TIMP-1蛋白和基因轉(zhuǎn)錄水平的表達差異，進而探討肥胖狀態(tài)下時慢性牙周炎影響腎臟損害可能的病理機制。
　　方法:采用免疫組化檢測小鼠腎臟組織中TGF-β1，MMP-2，TIMP-1蛋白的表達，進行半定量分析，另采用實時定量PCR技術(shù)進行TGF-β1，MMP-2，TIMP-1mRNA基因表達差異分析。

8、>　　結(jié)果:免疫組化顯示，HFP、HFC、LFP、LFC四組腎臟組織中TGF-β1、TIMP1蛋白有統(tǒng)計學(xué)差異，每兩組均差異明顯，HFP組表達量最高。MMP2表達與之相反，LF兩組表達較高。實時定量PCR結(jié)果顯示，肥胖是主要影響因素，HFP、HFC、LFP、LFC四組之間TGF-β1、MMP2、TIMP1mRNA表達有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)論:在肥胖狀態(tài)下，牙周干預(yù)促進了腎臟組織TGF-β1、TIMP-1這兩個促進纖維化抑制降解蛋白