SOCS3對IgA腎病小鼠腎臟損害的影響及機(jī)制探討.pdf

1、目的：
　　觀察IgA腎?。↖gA nephropathy，IgAN）小鼠中細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子3（suppressor of cytokine signaling3，SOCS3）及Toll樣受體4（Toll like receptor4，TLR4）的表達(dá)變化，探討體內(nèi)轉(zhuǎn)染上調(diào)SOCS3表達(dá)對IgAN小鼠腎損害的影響及可能的機(jī)制。
　　方法：
　　1.以 BALB/c小鼠為研究對象，通過免疫誘導(dǎo)方法：牛血清白蛋白(

2、BSA)+脂多糖(LPS)+四氯化碳(CCL4)建立IgA腎病小鼠模型。
　　2.通過慢病毒體內(nèi)轉(zhuǎn)染技術(shù)建立高表達(dá)的 SOCS3的小鼠，確定病毒轉(zhuǎn)染條件后設(shè)立4個(gè)實(shí)驗(yàn)組：正常對照組，IgAN組，IgAN+陰性病毒組，IgAN+SOCS3慢病毒組。
　　3.體內(nèi)轉(zhuǎn)染2周后采血檢測血肌酐，血白蛋白，谷丙轉(zhuǎn)氨酶，處死小鼠取腎臟組織行IgA免疫熒光檢測，腎組織石蠟切片行HE染色觀察腎臟病理改變，通過Katafuchi評分標(biāo)準(zhǔn)對腎臟病

3、理損傷進(jìn)行評估。
　　4.免疫組化檢測小鼠腎臟SOCS3、TLR4、MCP-1、TGF-β1的表達(dá)及定位，蛋白免疫印跡法檢測腎皮質(zhì) SOCS3、TLR4、MCP-1、TGF-β1的蛋白表達(dá)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測腎皮質(zhì)SOCS3、TLR4、MCP-1、TGF-β1的mRNA表達(dá)。
　　5.ELISA方法檢測外周血清IgA。
　　結(jié)果：
　　1.在造模過程正常組小鼠精神狀態(tài)良好，造模組則出現(xiàn)毛發(fā)粗糙，食欲不振，精神

4、萎靡等癥狀。血生化檢測我們可見IgAN組血漿白蛋白(ALB)明顯低于正常對照組（P<0.05），IgAN+SOCS3組與IgAN組，IgAN+陰性病毒組相比明顯升高（P<0.05）。IgAN組血谷丙轉(zhuǎn)氨酶（AL T）、肌酐(CR)明顯高于正常對照組（P<0.05），IgAN+SOCS3組與IgAN組，IgAN+陰性病毒組明顯下降（P<0.05）。
　　2.HE染色上正常對照組可見正常腎小球結(jié)構(gòu)，IgAN組以及陰性病毒組中可見明顯系

5、膜細(xì)胞增生，炎癥細(xì)胞浸潤，腎小管萎縮、間質(zhì)纖維化等病理變化。與正常對照組相比，IgAN組病理評分明顯上升，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　IgAN+SOCS3組與 IgAN組相比，病理評分明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　3.免疫熒光上正常對照組未見 IgA沉積，IgAN組、IgAN+陰性病毒組、IgAN+SOCS3組均可見 IgA呈顆粒狀、團(tuán)塊狀沉積在腎小球系膜區(qū)。三組之間免疫熒光亮度無明顯差異

6、。
　　4.免疫組化結(jié)果：SOCS3、TLR4主要表達(dá)于腎小管中，少量表達(dá)于腎小球中，MCP-1、TGF-β1主要表達(dá)于腎小球中，少量表達(dá)于腎小管中。IgAN組SOCS3、TLR4、MCP-1、TGF-β1表達(dá)量均明顯高于正常對照組，IgAN+SOCS3組中與IgAN組相比SOCS3表達(dá)量明顯上升，而TLR4表達(dá)量明顯下降，MCP-1、TGF-β1的表達(dá)量無明顯差異無明顯下降（P>0.05）。
　　5.正常對照組中腎臟組織S

7、OCS3、TLR4、MCP-1、TGF-β1的蛋白及mRNA水平明顯低于IgAN組。IgAN+SOCS3組與IgAN組相比SOCS3的蛋白及mRNA表達(dá)量均明顯上升，而TLR4的蛋白及mRNA表達(dá)量明顯下降，MCP-1的蛋白及 mRNA表達(dá)量無明顯差異，TGF-β1蛋白的表達(dá)量明顯下降（P<0.05），而mRNA水平表達(dá)量無明顯差異。
　　6.ELISA檢測我們可見IgAN組血IgA濃度明顯高于正常對照組（P<0.05）， IgA

8、N+SOCS3組與IgAN組，IgAN+陰性病毒組相比明顯下降（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.通過免疫誘導(dǎo)法可成功構(gòu)建IgA腎病小鼠模型。
　　2.在正常對照組腎臟組織中SOCS3、TLR4、MCP-1、TGF-β1的表達(dá)量較低， IgAN模型組SOCS3、TLR4、MCP-1、TGF-β1表達(dá)量增高。
　　3.通過慢病毒體內(nèi)轉(zhuǎn)染SOCS3，可上調(diào)IgAN小鼠腎組織SOCS3的表達(dá)，并通過下調(diào)TLR4的表